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- 文献和实验
- 技术资料
- 库存:
23
- 英文名:
Dekkera bruxellensis
- 保质期:
保存期限为12个月
- 供应商:
上海联祖
- 保存条件:
-20℃保存
- 规格:
50T
| 产品名称 | 规格 | 货号 |
| 布鲁塞尔德克酵母探针法荧光定量PCR试剂盒 | 50T | LZ-P3460 |
【检验原理】
本试剂盒即开即用,用户只需要提供样品DNA模板,引物和探针经过优化,灵敏性高,提供阳性对照,便于区分假阴性样品,特异性高,引物是根据指标DNA高度保守区设计,不会跟其他微生物的DNA发生交叉反应,既可用于定性检测,又可用于定量检测。用于定量检测时线性范围至少为5个数量级,本产品足够50次20μL体系的探针法荧光定量PCR反应。
【试剂组成】
【使用方法】
试剂准备(试剂准备区)
稀释标准曲线样品(以10E1-10E6拷贝/μL这6个10倍稀释度为例)。
由于标准品浓度非常高,因此下列稀释操作一定要在独立的区域进行,千万不能污染样品或本试剂盒的其他成分)。为增加产品稳定性和避免扩散传染性病原,本产品不提供活体样品做阳性对照,只提供无传染性的DNA片段作为阳性对照。
1. 标记6个离心管,分别为6,5,4,3,2,1。
2. 用带芯枪头分别加入45 μL荧光PCR专用模板稀释液,最好用带芯枪头,下同。
3. 在6号管中加入5 μL 1×10E7拷贝/μL 的阳性对照(试剂盒提供),充分震荡1分钟,得1×10E6拷贝/μL的标准曲线样品。放冰上待用。
4. 换枪头,在5号管中加入5 μL 1×10E6拷贝/μL 的阳性对照(上步稀释所得),充分震荡1分钟,得1×10E5拷贝/μL的标准曲线样品。放冰上待用。
5. 换枪头,在4号管中加入5 μL 1×10E5拷贝/μL 的阳性对照(上步稀释所得),充分震荡1分钟,得1×10E4拷贝/μL的标准曲线样品。放冰上待用。
6. 重复上面的操作直到得到6个稀释度的标准曲线样品。放冰上待用。
样本处理(样本处理区)
2.1如果有N个样品,最好设置N+2个提取,多出的一个是PC(样品制备阳性对照),一个是NC(样品制备阴性对照)。可以用10μL上步所得4号稀释液再加上一定量的水使总体积跟核酸制备试剂盒所要求的起始样本体积一样,以此作为PC。另外用水作为NC。
2.2 核酸提取:核酸提取可以采用上海抚生实业有限公司的核酸提取或纯化试剂,操作方法按照说明书进行。
3.Probe qPCR反应(20μL体系,在样品制备室进行)
3.1如果做定量分析并且只做1次重复,则标记N+9个PCR管,其中N+2个用于上步得到的N+2个样品,1个用于PCR阴性对照(用水做模板),6个用于标准曲线。如果做定性分析并且只做1次重复,则标记N+4个PCR管,其中N+2个用于上步得到的N+2个样品,1个用于PCR阴性对照(用水做模板),1个用于PCR阳性对照(直接用第6步第4号管的阳性对照稀释液做模板)。
| Rhesus antibody Rh IgG/Gold 胶体金标记的兔抗大鼠IgG 规格 0.5ml | Anti-VCP 含缬酪肽蛋白抗体Multi-class antibodies规格: 0.1ml |
| Rhesus antibody Rh KLK9 激肽释放酶9抗体(舒血管素9) 规格 0.1ml | Anti-CRF/CRH /FITC 荧光素标记促肾上腺皮质激素释放因子抗体IgGMulti-class antibodies规格: 0.2ml |
| HAV IgM 抗-HAV IgM(夹心法 一步法) | Phospho-Rad17 (Ser645): 0酸化细胞周期检控Rad17蛋白抗体 0.1ml |
| 大鼠胚胎心肌细胞;H9c2(2-1) | Rhesus antibody Rh IgG/Alexa Fluor 488 Alexa Fluor 488标记的兔抗马IgG 规格 0.1ml |
| 中国仓鼠卵巢细胞K1(亚系克隆);CHO-K1 | Rhesus antibody Rh IL-12 白介素12抗体 规格 0.1ml |
| SERPINC1 Others Cynomolgus 食蟹猴 SerpinC1 / AithrombinIII / ATIII 人细胞裂解液 (阳性对照) | Chicken IgM/APC 荧光素APC标记鸡IgM 0.1ml |
| IgG/Gold 金标记兔抗鸡IgG(10nm/15nm)Multi-class antibodies规格: 0.5ml | C3orf17: 3号染色体开放阅读框17抗体 0.2ml |
| IL-7(Rat Interleukin-7) ELISA kit 大鼠白介素7Multi-class antibodies规格: 48T | 小鼠肺血管平滑肌细胞完全培养基 100mL |
| IGFBP9: 胰岛素样生长因子结合蛋白9抗体 0.1ml | ANGPT4 Others Human 人 Angiopoietin 4 / ANG4 / ANGPT4 人细胞裂解液 (阳性对照) |
| Anti-Phospho-EEF2k (Ser366) 0酸化真核延伸因子激酶2抗体Multi-class antibodies规格: 0.1ml | SK-NEP-1人肾母细胞瘤细胞 SK-NEP-1 human renal cell McCOY's 5A+15%FBS |
| Rhesus antibody Rh ATF6 活化转录因子6抗体 规格 0.1ml | HEPG2.2.15 肝癌细胞HBV病毒株 |
| FLU(Human Influenza viruses IgG) ELISA Kit 人流感病毒抗体IgG 96T | HAVCR1 Others Mouse 小鼠 KIM-1 / TIM1 / HAVCR1 人细胞裂解液 (阳性对照) |
| AMIGO3: 粘附分子IgG样结构域蛋白3抗体 0.2ml | 布鲁塞尔德克酵母探针法荧光定量PCR试剂盒人张氏肝细胞;Chang liver |
| Rhesus antibody Rh phospho-CDKN2A/P16 (Ser152) 0酸化抑癌基因p16抗体 规格 0.1ml | RIN-m5f(大鼠胰岛β细胞瘤细胞) 5×106cells/瓶×2 |
| EDG1: 内皮细胞分化鞘脂G蛋白偶联受体1抗体 0.1ml | CHOdhfr细胞,二氢叶酸缺陷型中国仓鼠卵巢细胞 人癌细胞系,1590细胞 人星形胶质细胞裂解物HAL |
【注意事项】
1.PCR 操作各阶段应严格分区操作,避免交叉污染。
2.试剂盒各组分使用前应充分融化混匀,离心数秒后使用。
3.各组分不得与其他产品或不同批号的相应成分进行互换。
4.待测标本若不及时检测,应保存于-20℃或-70℃。
5.样品的处理应该严格按照生物安全规范操作。
6.PCR 操作人员应具有经验和受过专业培训。
7.本试剂盒仅用于科研使用,不做为临床诊断使用。
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所特有的,下游引物为通用引物就可以了。 荧光定量PCR检测方法有SYBR Green染料法和TaqMan探针法。前者需要调整引物浓度以及引物扩增效率,把引物二聚体调整到越小越好;探针法则需要设计荧光探针,这其中由于MGB探针需要碱基数量少和特异性好的特点而被推荐。 探针设计位置有3个:完全与miRNA序列相同、在miRNA与RT引物的交叉点、完全在RT引物上;这其中又有正向和反向互补两种情况。至于探针要设计在那个位置,根据自己试验情况而定,本人以为效果都差不多。 四、试验操作流程
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