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- 详细信息
- 技术资料
- 库存:
大量
- 英文名:
Chalcone Isomerase (CHI) Kit
- CAS号:
WS7001F
- 保质期:
3个月
- 供应商:
上海瓦兰生物
- 保存条件:
4℃
- 规格:
48T
本试剂盒仅供科研使用
查尔酮异构酶(chalcone isomerase,CHI)试剂盒说明书
(WS7001F 分光法 48 样)
一、产品简介:
查尔酮异构酶(CHI, EC 5.5.1.6)是第一个被认识的黄酮类化合物合成相关酶,也是黄
酮代谢途径中的关键酶之一。广泛存在于多种植物中,在植物的抗菌机制、抗胁迫、细
胞的发育和分化、色素的积累和外源基因的表达等方面起着重要的作用。
查尔酮异构酶(CHI)可使查尔酮形成二氢黄酮,通过检测查尔酮的初始降解速率进而
得出查尔酮异构酶的酶活性大小。
二、试剂盒组分与配制:
试剂名称
规格
保存要求
备注
提取液
液体 60mL×1 瓶
4℃保存
试剂一
液体 30mL×1 瓶
4℃保存
试剂二
粉体×2 支
4℃保存
临用前离心或甩几下使试剂落
入底部,每支再分别加 1.2mL
乙醇充分溶解,4℃保存。
三、所需的仪器和用品:
紫外分光光度计、1mL 石英比色皿(光径 1cm)、台式离心机、可调式移液器、研钵、
冰和蒸馏水。
四、查尔酮异构酶(CHI)活性测定:
建议正式实验前选取 2 个样本做预测定,了解本批样品情况,熟悉实验流程,避免实验
样本和试剂浪费!
1、样本制备:
称取约 0.1g 组织,加入 1mL 提取液,进行冰浴匀浆。12000rpm 4℃离心 15min,取上
清,置冰上待测。
【注】:若增加样本量,可按照组织质量(g):提取液体积(mL)为 1:5~10 的比例提取
2、上机检测:
① 紫外分光光度计预热 30min 以上,温度设定 30℃,调节波长至 380nm,蒸馏水调零。
② 试剂放在 30℃水浴 5min;
③ 按照下表在 1mL 石英比色皿(光径 1cm)中依次加入试剂:
试剂名称(μL)
测定管
样本
160
试剂一
600
试剂二
40
混匀,30℃条件下,立即于 380nm 处
读取吸光值 A1,10min 后读取 A2。
【注】:若ΔA 在零附近徘徊,可延长反应时间 T(如:30min 或更长),
或加大样本量 V1(如增至 240μL,则试剂一相应减少),重新
调整后的反应时间 T 和 V1 需代入计算公式重新计算。
五、结果计算:
1、按样本蛋白浓度计算:
酶活单位定义:每毫克组织蛋白每分钟吸光值变化 0.005 为一个酶活单位(U)。本试剂盒仅供科研使用
2
CHI(U/min/mg prot)=(ΔA÷0.005)÷(V1×Cpr) ÷T=125×ΔA÷Cpr
2、按样本鲜重计算:
酶活单位定义:每克样本每分钟吸光值变化 0.01 为一个酶活单位(U)。
CHI(U/min/g 鲜重)=(ΔA÷0.005)÷(W×V1÷V) ÷T=125×ΔA÷W
V---加入提取液体积,1 mL;
V1---加入样本体积,0.16 mL;
T---反应时间,10 min;
W---样本质量,g。
Cpr---样本蛋白质浓度,mg/mL,建议使用本公司的 BCA 蛋白含量测定试剂盒;
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查尔酮异构酶(CHI)试剂盒
¥900










