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总蛋白酶活性试剂盒

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  • ￥550
  • wksubio
  • WS3121F
  • 国内
  • 2025年10月13日
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    • 英文名：

      Total Protease Activity Kit

    • CAS号：

      WS3121F

    • 保质期：

      3个月

    • 供应商：

      上海瓦兰生物

    • 保存条件：

      4℃

    • 规格：

      24T

    本试剂盒仅供科研使用
    总蛋白酶试剂盒说明书
    (货号：WS3121F 分光法 24 样)
    一、产品简介：
    蛋白酶活力通常利用天然底物和合成底物进行测定。各种蛋白酶均可水解天然底物酪
    蛋白因此由酪蛋白测得的活力是蛋白酶的总活力。
    本试剂盒利用总蛋白酶催化水解偶氮酪蛋白，生成的产物于 366nm 有光吸收，通过
    测定吸光值的变化得出总蛋白酶活性大小。
    二、试剂盒组分与配制：
    试剂名称
    规格
    保存条件
    备注
    提取液
    液体 30mL×1 瓶
    4℃保存
    试剂一
    粉体 mg×1 瓶
    4℃保存
    用前甩几下使试剂落入底部，
    再加 7mL 的蒸馏水混匀备用。
    试剂二
    液体 6mL×1 瓶
    4℃保存
    试剂三
    液体 18mL×1 瓶
    4℃保存
    三、所需的仪器和用品：
    可见分光光度计、1mL 玻璃比色皿（光径 1cm）、台式离心机、可调式移液器、天平、
    研钵、冰和蒸馏水。
    四、总蛋白酶活性测定：
    建议正式实验前选取 2 个样本做预测定，了解本批样品情况，熟悉实验流程，避免实验
    样本和试剂浪费！
    1、样本制备：
    ① 组织样本：
    取约 0.1g 组织，加入 1mL 提取液，进行冰浴匀浆。4℃×12000rpm 离心 10min，
    取上清，置冰上待测。
    【注】：若增加样本量，可按照组织质量（g）：提取液体积(mL)为 1：5~10 的比例进行提取
    ② 细菌/细胞样本：先收集细菌或细胞到离心管内，离心后弃上清；取约 500 万细菌或
    细胞加入 1mL 提取液，超声波破碎细菌或细胞（冰浴，功率 200W，超声 3s，间隔
    10s，重复 30 次）；4℃×12000rpm 离心 10min，取上清，置冰上待测。
    ③ 液体样本：直接检测；若浑浊，离心后取上清检测。
    2、上机检测：
    ① 可见分光光度计预热 30min 以上，调节波长至 366nm，蒸馏水调零。
    ② 所有试剂解冻至室温或于 25℃水浴锅中孵育 20min。
    ③ 在 EP 管中依次加入：本试剂盒仅供科研使用
    2
    试剂名称（μL）
    测定管
    对照管
    样本
    120
    120
    试剂一
    120
    试剂二
    120
    120
    混匀，30℃孵育 60min
    试剂三
    360
    360
    试剂一
    120
    立即混匀，低温（放冰上）静置 5min；室温 12000rpm 离
    心 5min，取全部上清液至 1mL 玻璃比色皿（光径 1cm）
    中，于 366nm 处读值。ΔA=A 测定-A 对照(每个样本做一
    个自身对照)。
    【注】：若ΔA 在零附近徘徊，可以延长 30℃孵育时间 T（如延长至 90min）或增加样本取样
    质量 W（如增至 0.2g），则改变后的反应时间 T 和 W 需代入计算公式重新计算。
    五、结果计算：
    1、按样本鲜重计算：
    定义：每克组织每小时反应体系中变化 1 个吸收单位定义为 1 个偶氮酪蛋白单位。
    总蛋白酶(偶氮酪蛋白单位/h/g 鲜重)=ΔA÷1÷(W×V1÷V)÷T=8.3×ΔA÷W
    2、按样本蛋白浓度计算：
    定义：每毫克组织蛋白每小时反应体系中变化 1 个吸收单位定义为 1 个偶氮酪蛋白单位。
    总蛋白酶(偶氮酪蛋白单位/h/mg prot)=ΔA÷1÷(V1×Cpr)÷T=8.3×ΔA÷Cpr
    3、按细菌/细胞数量计算：
    定义：每 104个细菌/细胞每小时反应体系中变化 1 个吸收单位为 1 个偶氮酪蛋白单位。
    总蛋白酶(偶氮酪蛋白单位/h/104 cell)=ΔA÷1÷(500×V1÷V)÷T=0.02×ΔA÷Cpr
    4、按照液体体积计算：
    定义：每毫升液体每小时反应体系中变化 1 个吸收单位定义为 1 个偶氮酪蛋白单位。
    总蛋白酶(偶氮酪蛋白单位/h/mL)=ΔA÷1÷V1÷T=8.3×ΔA
    V---加入提取液体积，1 mL；
    V1---加入样本体积，0.12mL；
    W---样本质量，g；
    T---反应时间，60min=1h；
    500---细胞数量，万；
    Cpr---样本蛋白质浓度，mg/mL；建议使用本公司的 BCA 蛋白含量检测试剂盒。

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