- ￥1060.80
- 邦景
- BJ-PJ6526
- 国产
- 2025年07月13日
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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 库存：
24
- 保质期：
12个月
- 供应商：
上海邦景
- 保存条件：
2-8℃
- 规格：
20 次
| 产品名称 | 货号 | 规格 | 价格 |
| pBM26 Toposmart Cloning Kit（gateway系统入门 TOPO克隆载体） | BJ-PJ6526 | 20 次 | 1060.8 |
保存条件：-20℃保存
产品介绍：
利用痘苗病毒的拓扑异构酶I(Topoisomerase I)的切割再连接的特点将PCR产物定向克隆到线性化的pBM26载体中。适用于克隆由Pfu、sPfu、KOD、Xerox、Phusion和Q5等高保真DNA聚合酶扩增的平末端PCR产物。pBM26载体类似于invitrogen公司的pENTR/D-TOPO入门载体，具有attL1和attL2，为gateway系统中的入门载体。引物M13F(-21)r和M13R可用于菌落PCR和测序鉴定。
产品特点：
(1) 连接反应仅需 5 分钟。
(2) 只适合平末端 PCR 产物的快速、高效、定向克隆。
(3) 载体采用了新的制备工艺，零背景，无需蓝白斑筛选
(4) 可在基因的 C 端中融合 Flag 标签序列。
(5) 载体为卡那霉素抗性。
注意事项：
(1) 引物要求：PCR 引物 5’端不能进行磷酸化修饰，普通商业化引物即可。上游引物的 5’端添加 CACC 四个碱基（CACC 为真核表达所必需的Kozak 序列）。如果目的蛋白需要在 C 端带 FLAG 标签，下游引物则需要去掉基因本身的终止密码子（3 个碱基），目的蛋白的翻译终止由 FLAG 标签的终止密码子 TAA（位于 Xho I 酶切位点前）来实现。
(2) DNA 聚合酶：选用 Pfu、sPfu、Phusion、Q5、KOD 和 Xerox 等高保真 DNA 聚合酶用于 PCR 扩增。
(3)连接时间：5-15 分钟，一般为 15 分钟。
(4)连接温度：室温 (22℃-30℃)，可使用PCR仪控温。最佳反应温度为25℃。若片段有高GC等复杂结构，可在37℃反应。
(5)产物要求：为保证PCR产物完整，建议72℃后延伸5-10分钟。连接前使用琼脂糖凝胶电泳检测PCR产物的质量和纯度，如PCR产物为非单一性条带，目的片段一定要切胶回收。如PCR产物为单一条带，无引物二聚体，可以取1-3?l的PCR产物直接连接。但若扩增模板为质粒DNA，应注意质粒的抗性。由于pBM26载体为卡那抗性，以氨苄抗性的模板质粒扩增的PCR产物直接连接后的产物可涂布在卡那抗性的LB平板上。以卡那抗性的模板质粒扩增的PCR产物应切胶回收后再连接。
(6)片段用量：胶回收的DNA片段一般使用量为50-100ng。对照片段为5’端带CACC四个碱基的全长EGFP基因的平末端产物。
(7)在M13F(-21)和M13R引物干粉管中加120?l灭菌水即为5?M浓度的引物。
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文献和实验PCR克隆主要有TA克隆法, 限制性酶切与连接法，杂交法和近期开发出来的特异性重组法等。但因为TA克隆法操作最简单，快速和高效的原因，成为Taq聚合酶PCR产物的最佳克隆方法。TA克隆法由Invitrogen发明，并拥有全球TA Cloning商标的专利权。TA克隆方法（Original TA Cloning Kit）利用Taq聚合酶同时具有的末端连接酶的功能，在每条PCR扩增产物的3`端自动添加一个3`-A突出端。Invitrogen公司TA克隆系统和Topo TA克隆系统都提供一个线性含
限度酶克隆 ）。不需在PCR 扩增产物上加接头，即可直接进行克隆 。 图32 The TA Cloning® Concept Topo TA克隆 方法（Topo TA Cloning Kit
【公告】PCR版资源共享---密码全部公开，请看主题贴首页!更换平台，重新开放！20070404
．PCR Cloning protocols.pdf （大炮兵主义战友提供）26．invitrogen公司技术讲座：Next Generation RNAi Synthetics and Vectors.PDF27．invitrogen公司技术讲座：革命性的新技术——TOPO克隆及Gateway亚克隆技术.PDF28．invitrogen公司技术讲座：Overview of Tools for Cell Biology including Apoptosis.PDF29．Gateway
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