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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 英文名:
/
- 库存:
现货库存
- 供应商:
南京万木春
- 肿瘤类型:
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- 细胞类型:
原代细胞
- 品系:
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- 组织来源:
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- 相关疾病:
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- 物种来源:
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- 免疫类型:
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- 细胞形态:
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- 是否是肿瘤细胞:
否
- 器官来源:
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- 运输方式:
常温/干冰
- 年限:
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- 生长状态:
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- 规格:
5×10^5/T25方瓶
一、小鼠心肌细胞简介
心肌的工作细胞包括心房肌细胞和心室肌细胞,受植物性神经支配,属于有横纹的不随意肌,具有兴奋收缩的能力。动物体内心肌细胞为短圆柱状,一般只有一个细胞核,心肌细胞之间有闰盘结构。该处细胞膜凹凸相嵌,并特殊分化形成桥粒,彼此紧密连接,但心肌细胞之间并无原生质的连续。心肌细胞的细胞核多位于细胞中部,形状似椭圆或似长方形,其长轴与肌原纤维的方向一致。肌原纤维绕核而行,核的两端富有肌浆,其中含有丰富的糖原颗粒和线粒体,以适应心肌持续性节律收缩活动的需要。本公司生产的小鼠心肌细胞(新生)采用酶解法制备而来,细胞总量约为5×105/T25方瓶,肌钙蛋白I(cTn I)呈阳性,细胞纯度可达90%以上,且不含有HIV-1、 HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌等。
二、 使用方法
1 、您收到细胞后,请按照以下方法进行操作:
取出 T25 方瓶, 75%酒精擦拭培养瓶,拆下封口膜,放入 37℃ , 5%CO2 细胞培养箱中静置 2-3 小时, 以稳定细胞状态,然后打开瓶子回收瓶子中培养液作为后续培养此细胞的完全培养液(备注: 先使用瓶子中完全培养液培养及尽快冻存保种细胞, 保存种子后再尝试自己完全培养液培养观察是否适合此细胞生长,以免使用自己培养液不适合细胞生长造成细胞状态不好或死亡) ,最后按照后面细胞传代步骤进行细胞传代培养。
2 、细胞传代:
1)细胞生长至覆盖培养瓶的 90%面积时,弃 T25 方瓶中的培养液, 用 PBS 清洗细胞 3 次;
2)添加 0.25%胰蛋白酶消化液约 2ml 至培养瓶中 37 度培养箱放置 3-5 分钟,倒置显微镜下观察,待细胞基本完全脱落后加入完全培养基终止消化,用滴管混匀并将悬液转移至 15ml 离心管中,1000rpm/min,离心 5min;
3)弃上清,沉淀细胞用 10ml 完全培养基重悬,然后按 1:2 比例进行分瓶传代, 最后放入 37℃ ,5%CO2 细胞培养箱中培养;
4)待细胞完全贴壁后, 观察培养结果,之后进行换液培养或传代。
3 、细胞冻存:
1)细胞生长至覆盖培养瓶的 90%面积时,弃 T25 方瓶中的培养液,用 PBS 清洗细胞 3 次;
2)添加 0.25%胰蛋白酶消化液约 2ml 至培养瓶中 37 度培养箱放置 3-5 分钟,倒置显微镜下观察,待细胞基本完全脱落后加入完全培养基终止消化,用滴管混匀并将悬液转移至 15ml 离心管中,1000rpm/min,离心 5min;
3)用适当量的冻存液(完全培养液: FBS:DMSO=7:2:1)重悬细胞,并放置于冻存管中;
4)先将细胞冻存管放置于-20℃ 1h,然后将其移入-80℃过夜, 24h 后转入液氮中进行长期储存(或者按照梯度程序降温模式直接放置-80 度冻存后并转移液氮中长期储存)。
4、细胞复苏:
1)从液氮中取出细胞冻存管(注意:佩戴防爆管面具) ,快速将其置入 37℃水浴中解冻, 直至冻存管中无结晶,然后用 75%的酒精擦拭冻存管外壁;
2)将冻存管中的细胞转移至含 5ml 完全培养液无菌离心管中,1000rpm 离心 5min ,然后加入 5ml 完全培养液混匀细胞, 将细胞悬液转移至 T25 培养瓶中, 放置于 37℃ , 5%CO2 细胞培养箱中培养;
3)第二天,换用新鲜完全培养基继续培养。
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技术资料小鼠心肌细胞(原代)
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