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- wksubio
- WS1121F
- 国内
- 2025年07月28日
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- 详细信息
- 技术资料
- 库存：
大量
- 英文名：
Chymotrypsin test kit/Chymotrypsin test kit
- CAS号：
WS1121F
- 保质期：
3个月
- 供应商：
上海瓦兰生物
- 保存条件：
4℃
- 规格：
24T/48T
| 规格： | 24T | 产品价格： | ￥440.0 |
|---|---|---|---|
| 规格： | 48T | 产品价格： | ￥840.0 |
本试剂盒仅供科研使用
糜蛋白酶/胰凝乳蛋白酶（Chymotrypsin）试剂盒说明书
(货号：WS1121F 分光法 24 样)
一、产品简介：
糜蛋白酶（EC 3.4.21.1）又称胰凝乳蛋白酶，是胰腺分泌的一种蛋白水解酶，具有肽链
内切酶的作用，通过切断蛋白质肽链中酪氨酸、苯丙氨酸的羧端肽链作用，专一水解羧端芳
香族氨基酸。临床上糜蛋白酶用于痰液稀化，对脓性和非脓性痰液均有效；也用于创伤或手
术后伤口愈合。
糜蛋白酶可催化酪蛋白水解生成含酚的氨基酸，含酚的氨基酸与福林酚反应后显蓝色；
其颜色的深浅与胃蛋白酶活性呈正比。
二、试剂盒组分与配制：
试剂名称
规格
保存条件
备注
提取液
液体 30mL×1 瓶
4℃保存
试剂一
粉体 mg×1 瓶
4℃保存
临用前加 2.8mL 的试剂四，再加
5.6mL 的试剂二沸水加热，涡旋
振荡（反复几次）直到全部溶解，
再加 24mL 的试剂二混匀，配置
完的试剂 4℃保存，三天内用完。
试剂二
液体 30mL×1 瓶
4℃保存
试剂三
液体 5mL×1 瓶
4℃保存
试剂四
液体 8mL×1 瓶
4℃保存
试剂五
液体 10mL×1 瓶
4℃保存
标准品
液体 2mL×1 支
4℃保存
质控品
粉体 mg×1 支
4℃保存
若用该试剂，则用前加 1mL 蒸馏
水溶解，再用蒸馏水稀释 10 倍，
即 0.1mg/mL 的糜蛋白酶。
三、所需的主要仪器和用品：
可见分光光度计、1mL 玻璃比色皿（光径 1cm）、台式离心机、可调式移液器、天平
四、糜蛋白酶活性测定：
建议正式实验前选取 2 个样本做预测定，了解本批样品情况，熟悉实验流程，避免实验
样本和试剂浪费！
1、样本制备：
① 组织样本：
取约 0.1g 组织，加入 1mL 提取液，进行冰浴匀浆。4℃×4000rpm 离心 5min，取
上清，置冰上待测。
【注】：若增加样本量，可按照组织质量（g）：提取液体积(mL)为 1：5~10 的比例进行提取
② 液体样本：液体用提取液按照 1:1 的比例混合稀释后，4℃×4000rpm，离心 5min，
取上清液检测。
2、上机检测：
① 可见分光光度计预热 30min 以上，调节波长至 680nm，蒸馏水调零。
② 所有试剂解冻至室温。本试剂盒仅供科研使用
2
③ 在 EP 管中依次加入：
试剂名称（μL）
测定管
对照管
样本
100
100
试剂一
500
试剂三
100
37℃孵育 10min
试剂三
100
试剂一
500
37℃孵育 10min，4000rpm 室温离心 10min，上清液待测
④ 显色反应，在 EP 管中：
试剂名称（μL）
测定管
对照管
标准管
（只做一次）
空白管
（只做一次）
上清液
200
200
标准品
200
提取液
200
蒸馏水
200
200
200
200
试剂四
100
100
100
100
试剂五
200
200
200
200
37℃孵育 20min 后（若浑浊则室温 4000rpm 离心 5min），全部上清液转移至
1mL 玻璃比色皿中，于 680nm 处读取各管的吸光值 A。ΔA=A 测定-A 对照。
【注】1. 若ΔA 在零附近徘徊，可以延长反应时间 T（如 37℃孵育 10min 延长至 20min）或增加样本
量 V1（如增至 200μL，则试剂一相应减少），则改变后的反应时间 T 和样本量 V1 需代入计
算公式重新计算。
2. 若 A 测定值大于 1.5，可以减少样本量 V1（如减至 50μL，用提取液相应补充），则改变后
的样本量 V1 需代入计算公式重新计算。
五、结果计算：
1、按样本蛋白浓度计算：
酶活定义：37℃每毫克蛋白每分钟催化酪蛋白水解生成 1μg 氨基酸为 1 个酶活单位(U)。
糜蛋白酶（U/mg prot）=[ΔA÷（A 标准-A 空白）×C 标准×V2]÷ (V1×Cpr) ÷T
=35×ΔA÷（A 标准-A 空白）÷Cpr
2、按样本鲜重计算：
酶活定义：37℃每 g 组织每分钟催化酪蛋白水解生成 1μg 氨基酸为 1 个酶活单位(U)。
糜蛋白酶（U/g 鲜重）=[ΔA÷（A 标准-A 空白）×C 标准×V2]÷(W×V1÷V) ÷T
=35×ΔA÷（A 标准-A 空白）÷W
3、液体中酶活力的计算:
酶活定义：37℃每毫升液体每分钟催化酪蛋白水解生成 1μg 氨基酸为 1 个酶活单位(U)。
糜蛋白酶（U/mL）=[ΔA÷（A 标准-A 空白）×C 标准×V2]÷V1÷T
=35×ΔA÷（A 标准-A 空白）
V---加入提取液体积，1 mL；
V1---加入样本体积，0.1mL；
V2---第③歩反应总体积，0.7mL；
T---反应时间，10min；
C 标准---50μg/mL；
W---样本质量，g；
Cpr---样本蛋白质浓度，mg/mL；建议使用本公司的 BCA 蛋白含量检测试剂盒
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