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糜蛋白酶试剂盒/胰凝乳蛋白酶试剂盒,微板法

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  • ¥780 - 1120
  • wksubio
  • WS1121W
  • 国内
  • 2025年10月30日
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    • 英文名

      Chymotrypsin test kit/Chymotrypsin test kit

    • CAS号

      WS1121W

    • 保质期

      3个月

    • 供应商

      上海瓦兰生物

    • 保存条件

      4℃

    • 规格

      96T/48T

    规格:96T产品价格:¥1120.0
    规格:48T产品价格:¥780.0
    本试剂盒仅供科研使用
    糜蛋白酶/胰凝乳蛋白酶(Chymotrypsin)试剂盒说明书
    (货号:WS1121W 微板法 96 )
    一、产品简介:
    糜蛋白酶(EC 3.4.21.1)又称胰凝乳蛋白酶,是胰腺分泌的一种蛋白水解酶,具有肽链
    内切酶的作用,通过切断蛋白质肽链中酪氨酸、苯丙氨酸的羧端肽链作用,专一水解羧端芳
    香族氨基酸。临床上糜蛋白酶用于痰液稀化,对脓性和非脓性痰液均有效;也用于创伤或手
    术后伤口愈合。
    本试剂盒采用糜蛋白酶催化水解 N-琥珀酰-丙酰氨-丙酰氨-脯酰氨-苯丙氨酸对硝基酰*
    胺(SAAPFpNA)生成对硝基*胺,后者在 405nm 有最大吸收峰,通过测定吸光值升高速
    率即可得出糜蛋白酶的活性大小。
    二、试剂盒组分与配制:
    试剂名称
    规格
    保存条件
    备注
    提取液
    液体 100mL×1
    4℃保存
    试剂一
    液体 15mL×1
    4℃保存
    试剂二
    液体 0.6mL×1
    -20℃保存
    若凝固则可于 37℃水浴至融化,
    再加 3.8mL 蒸馏水混匀备用。
    标准品
    粉体 mg×1
    4℃保存
    若重做标曲,则用到该试剂。
    三、所需的主要仪器和用品:
    酶标仪、96 孔板、台式离心机、可调式移液器、天平、研钵、冰和蒸馏水。
    四、糜蛋白酶/胰凝乳蛋白酶活性测定:
    建议正式实验前选取 2 个样本做预测定了解本批样品情况熟悉实验流程避免实
    验样本和试剂浪费
    1、样本制备:
    ① 组织样本:
    取约 0.1g 组织,加入 1mL 提取液,进行冰浴匀浆。4℃×4000rpm 离心 5min,取上
    清,置冰上待测。
    【注】:若增加样本量,可按照组织质量(g):提取液体积(mL)15~10 的比例进行提取
    ② 液体样本:若是澄清液体,直接检测,若液体样本浑浊,需 4℃×12000rpm,离心 10min
    取上清液检测。
    2、上机检测:
    ① 酶标仪预热 30min 以上,调节波长至 405nm
    ② 所有试剂解冻至室温。在 EP 管中依次加入:
    试剂名称(μL
    测定管
    样本
    30
    试剂一
    130
    试剂二
    40
    混匀, 立即于 405nm 处测定吸光值 A137℃
    条件下反应 5min 后读取 A2ΔA=A2-A1本试剂盒仅供科研使用
    2
    【注】1 .ΔA 在零附近徘徊,可以延长反应时间 T(如延长至 10min 后读取 A2)或增加样本量 V1(如增
    60μL,则试剂一相应减少),则改变后的反应时间 T 和样本量 V1 需代入计算公式重新计算。
    2. ΔA 大于 0.5,可缩短反应时间 T(如缩至 2min 后读取 A2)或减少样本量 V1(如减至 10μL
    则试剂一相应增加),则改变后的反应时间 T 和样本量 V1 需代入计算公式重新计算。
    五、结果计算:
    1、标准曲线:y = 0.0259x - 0.001x 为标准品(nmoL)y ΔA
    2、按样本鲜重计算:
    单位定义:每克组织每分钟催化产生 1nmoL 对硝基*胺为一个酶活单位(U)。
    糜蛋白酶/胰凝乳蛋白酶(nmoL/min/g 鲜重)=[(ΔA+0.001)÷0.0259]÷(W×V1÷V)÷T
    =257.4×(ΔA+0.001)÷W
    3、按样本蛋白浓度计算:
    单位定义:每毫克组织蛋白每分钟催化产生 1nmoL 对硝基*胺为一个酶活单位(U)。
    糜蛋白酶/胰凝乳蛋白酶(nmoL/min/mg prot)=[(ΔA+0.001)÷0.0259]÷(V1×Cpr)÷T
    =257.4×(ΔA+0.001)÷Cpr
    4、按照液体体积计算:
    单位定义:每毫升液体每分钟催化产生 1nmoL 对硝基*胺定义为一个酶活单位(U)。
    糜蛋白酶/胰凝乳蛋白酶(nmoL/min/mL)=[(ΔA+0.001)÷0.0259]÷V1÷T=257.4×(ΔA+0.001)
    V---加入提取液体积,1 mL
    V1---加入样本体积,0.03 mL
    W---样本质量,g
    T---反应时间,5min
    Cpr---样本蛋白质浓度,mg/mL;建议使用本公司的 BCA 蛋白含量检测试剂盒;
    附:标准曲线制作过程:
    1 制备标准品母液(50μmol/mL):临用前甩几下或离心,使粉体落入底部,加入 0.5mL
    乙醇,涡旋震荡溶解后再加入 0.5mL 的蒸馏水混匀,得到 50μmol/mL 备用。
    2 用蒸馏水把母液稀释成以下浓度:0, 0.2, 0.4, 0.6, 0.8, 1μmol/mL。也可根据实际来调
    整浓度。
    3 30μL 标准品+170μL 试剂一,混匀后于 405nm 处读取 A 值,依据结果即可制作标准
    曲线。

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