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- CCK-8检测细胞增殖
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- 2026年04月29日
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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 提供商：
上海研匠生物科技有限公司
- 服务名称：
CCK-8检测细胞增殖
Cell Counting Kit-8（简称CCK-8）可用于简便而准确的细胞增殖和毒性分析。用途：药物筛选、细胞增殖测定、细胞毒性测定、肿瘤药敏试验
CCK8的优点：使用方便，省去了洗涤细胞，不需要放射性同位素和有机溶剂；CCK-8法能快速检测；CCK-8法的检测灵敏度很高，甚至可以测定较低细胞密度；CCK-8法的重复性优于MTT 法；CCK-8法对细胞毒性小；CCK-8细胞活性检测试剂中为1瓶溶液，毋需预制，即开即用。
二、实验流程
1. 细胞增殖分析
- 制备细胞悬液：细胞计数
- 接种到96孔板中：根据合适的铺板细胞数，每孔约100ul细胞悬液，同样的样本可做3个重复。
- 37℃培养箱中培养：细胞接种后贴壁大约需要培养2-4小时，如果不需要贴壁，这步可以省去。
- 加入10ul CCK8：由于每孔加入CCK8量比较少，有可能因试剂沾在孔壁上而带来误差，建议在加完试剂后轻轻敲击培养板以帮助混匀。或者直接配置含10%CCK8的培养基，以换液的形式加入。
- 培养1-4小时:细胞种类不同，形成的Formazan的量也不一样。如果显色不够的话，可以继续培养，以确认最佳条件。特别是血液细胞形成的Formazan很少，需要较长的显色时间（5-6小时）。
- 测定450nm吸光度：建议采用双波长进行测定，检测波长450-490nm，参比波长600-650nm。
- 制备细胞悬液：细胞计数
- 接种到96孔板中：根据合适的铺板细胞数，每孔约100ul细胞悬液，同样的样本可做3个重复。
- 37℃培养箱中培养：细胞接种后贴壁大约需要培养2-4小时，如果不需要贴壁，这步可以省去。
- 加入不同浓度的毒性物质
- 37℃培养箱中培养：加入毒性物质的培养时间，要看毒性物质的性质和细胞的敏感性，一般要根据细胞周期来决定，起码要一代以上的时间。
- 加入10ul CCK8：由于每孔加入CCK8量比较少，有可能因试剂沾在孔壁上而带来误差，建议在加完试剂后轻轻敲击培养板以帮助混匀。
- 培养1-4小时:细胞种类不同，形成的Formazan的量也不一样。如果显色不够的话，可以继续培养，以确认最佳条件。特别是血液细胞形成的Formazan很少，需要较长的显色时间（5-6小时）。
- 测定450nm吸光度：建议采用双波长进行测定，检测波长450-490nm，参比波长600-650nm。
1. 客户提供：药物。
2. 公司提供：基本实验步骤、CCK-8 检测结果。
3. 实验周期：10个工作日
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文献和实验一、实验原理 细胞活力检测试剂盒(CCK-8) 可用于简便而准确的细胞增殖和毒性分析。 其基本原理为：该试剂中含有WST-8【化学名：2-(2-甲氧基-4-硝基苯基)-3-(4-硝基苯基)-5-(2,4-二磺酸苯)-2H-四唑单钠盐】，在电子载体1-甲氧基-5-甲基吩嗪鎓硫酸二甲酯（1-Methoxy PMS）的作用下被细胞中的脱氢酶还原为具有高度水溶性的黄色甲瓒产物（Formazan dye）。生成的甲瓒物的数量与活细胞的数量成正比。因此可利用这一特性直接进行细胞增殖和毒性分析。CCK-8法
检测细胞增殖的方法很多，MTT、CCK8、BrdU 等等，你知道细胞可以 CFSE 染色用流式来检测细胞增殖么？好啦，不知道的同学搬好小板凳排排坐啦！CFSE 是一种荧光染料，脂溶性高，易进入细胞，可以与胞内氨基酸发生不可逆的结合，在细胞的分裂过程中能够进入子代细胞，同时荧光强度也变为母细胞的一半，可用流式或荧光显微镜对其进行分析。下面我们就开始动手，用流式来检测脾淋巴细胞的增殖。☟☟☟— 先准备一些试剂 —ConA 储存液：用双蒸水配置终浓度为 1 mg/ml（200×）CFSE 储存
CCK-8较MTT法测定细胞增殖/毒性实验，步骤更简便，灵敏度更高，重复性更好 第一 从基础操作方面对比 CCK-8 方法 MTT方法 1 还原后的甲�物为水溶性，不需要溶解 还原后的甲�物位非水溶性的，需要有机溶剂溶解
