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- Real-Time PCR 技术，又称实时定量荧光PCR，是指在PCR反应体系中加入荧光基团，利用荧光信号累积实时监测整个PCR进程，最后通过标准曲线对未知模板进行总量分析或通过Ct值对模板进行相对定量。
- 上海
- 2026年02月10日
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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 提供商：
上海研匠生物科技有限公司
- 服务名称：
Real-time PCR实验
- 规格：
每样本每基因
实时荧光定量RT-PCR实验
一、技术简介
实时荧光定量PCR技术是指在PCR反应体系中加入可与DNA产物特异性结合的荧光基团，利用荧光信号积累实时监测整个PCR进程，最终通过相对定量或绝对定量的方法确定各个样本的本底表达量。qPCR检测常用的两种方法：染料法和TaqMan探针法。
二、实验流程
1. 提取RNA。
2. DNAaseI 消化样品RNA 中的DNA。
3. RNA琼脂糖凝胶电泳。
4. RNA反转录为cDNA。
5. cDNA与引物质量检测。
6. 利用相对定量的方法分析目的基因表达量的情况。
7. 定量 PCR检测。
8. 分析扩增曲线和溶解曲线。
三、服务说明及结果
1. 客户提供：样本。
2. 公司提供：高质量的RNA、RNA电泳图、扩增曲线图、熔解曲线图、完整报告。
3. 实验周期：5-10个工作日。
附1：实验流程
附2：实验结果
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文献和实验定量的方法。 实时荧光定量 PCR 是目前确定样品中 DNA(或 cDNA) 拷贝数最敏感、最准确的方法。如果用于 RNA 检测，这被称为逆转录实时 PCR 即（Real-time RT-PCR）是实时 PCR 法，它是指对 DNA 或经过反转录（RT-PCR）的 RNA 通过聚合酶链式反应并实时监测 DNA 的放大过程，在扩增的指数增长期就测量扩增产物，因为扩增指数增长期测量值与特异 DNA（RNA）起始量存在相关性，从而实现定量检测。 RealTime PCR 的基本目标是精确
定量RT-PCR （Quantitative RT-PCR）
A = B(1+e) n A=amplified products, B=input templates, n=cycle number, and e=amplification efficiency. Factors affecting amplification efficiency in the RT-PCR process include the efficiency of reverse
实时荧光定量PCR从1996年美国AppliedBiosystems公司推出实时荧光定量PCR技术以来，该技术已经越来越广泛的应用到各类RNA的研究中，成为研究RNA必不可少的实验手段之一。目前比较常用的方法有两种：（1）TaqMan荧光探针法：该方法在特异性探针的两端分别标记一个报告荧光基团和一个淬灭荧光基团。当探针完整时，荧光基团发光被淬灭基团吸收；在PCR扩增过程中，探针被降解，荧光基团与淬灭基团分离，发出可被检测到的荧光，以此来监测整个PCR过程。（2）SYBR荧光染料法：该方法
