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- elabs
- E-EL-H1471
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- 2025年07月13日
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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 适应物种：
Human/人
- 样本：
Serum, Plasma, Other biological fluids/血清、血浆等其它生物样品
- 供应商：
elabs
- 检测方法：
Sandwich-ELISA/双抗体夹心ELISA
- 规格：
96T
英文名称/English Name：Human MTX (Methotrexate) ELISA Kit
货号/Catalog Number：E-EL-H1471
种属/Organism：Human/人
指标名称/Other Names：MTX
检测方法/Method：Sandwich-ELISA/双抗体夹心ELISA
检测范围/Detection Range：
灵敏度/Sensitivit：
检测样品/Sample Type：Serum, Plasma, Other biological fluids/血清、血浆等其它生物样品
检测原理：
本试剂盒采用双抗体夹心ELISA法。用抗人MTX抗体包被于酶标板上，实验时标本或标准品中的MTX会与包被抗体结合，游离的成分被洗去。依次加入生物素化的抗人MTX抗体和辣根过氧化物酶标记的亲和素。抗人MTX抗体与结合在包被抗体上的人MTX结合、生物素与亲和素特异性结合而形成免疫复合物，游离的成分被洗去。加入显色底物，TMB在辣根过氧化物酶的催化下现蓝色，加终止液后变黄。用酶标仪在450nm波长处测OD值，MTX浓度与OD450值之间呈正比，通过绘制标准曲线求出标本中MTX的浓度。
标本收集:
血清：全血标本于室温放置2小时或4℃过夜后于1000×g离心20分钟，取上清即可检测，收集血液的试管应为一次性的无热原，无内毒素试管。血浆：抗凝剂推荐使用EDTA，标本采集后30分钟内于1000×g离心15分钟，取上清即可检测。避免使用溶血，高血脂标本。其它生物标本：1000×g离心20分钟，取上清即可检测标本应清澈透明，悬浮物应离心去除。标本收集后若不及时检测，请按一次使用量分装，冻存于-20℃/-80℃电冰箱内，避免反复冻融，6个月内进行检测,4℃保存的应在1周内进行检测。 如果样本中检测物浓度高于标准品最高值，请根据实际情况，做适当倍数稀释(建议先做预实验，以确定稀释倍数)。
试验所需自备物品:
酶标仪(450nm波长滤光片)高精度移液器，EP管及一次性吸头：0.5-10μL, 2-20μL, 20-200μL, 200-1000μL37℃恒温箱, 双蒸水或去离子水
关键词：人甲胺喋呤(MTX)Elisa试剂盒，人Elisa试剂盒，小鼠elisa试剂盒，大鼠elisa试剂盒
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，PEG-4000:由博德公司李勇老师惠赠。DMEM培养基:由美国GIBCO公司生产。小牛血清:由杭州四季青工程材料研究所生产。RPHA试剂盒:兰州生物制品研究所生产。 1.2 方法 ［2］ 1.2.1 NS-1细胞的制备 为确保细胞对HAT培养基的敏感性，复苏稳定后，移种于含1%8-AG的DMEM培养基中，融合前1周换用无8-AG的培养液。 1.2.2 CHO-C 28 细胞的制备 复苏稳定的细胞，融合前用不含MTX的培养基传代一次，备用
可更好地表达外源蛋白，外源基因在CHO细胞中扩增是提高表达水平的重要策略之一。 DHFR基因扩增系统 DHFR基因扩增系统最常用，当携带DHFR基因的表达质粒转染CHO细胞后，或携带DHFR基因的标志质粒与携带外源基因的表达质粒共转染CHO-DHFR-细胞后，可以得到在选择培养基生长的细胞克隆，DHFR可被叶酸类似物氨甲喋呤（Amethopterin，MTX）所抑制，不断提高MTX浓度，绝大多数细胞死亡，但在极少数幸存下来的抗性细胞中，DHFR基因均得以扩增。进行性选择抗氨甲喋呤的细胞
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