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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 供应商:
上海联祖
- 库存:
54
- 英文名:
BT-549
- 生长状态:
贴壁生长
- 器官来源:
乳腺
- 是否是肿瘤细胞:
否
- 细胞形态:
上皮样
- 规格:
T25培养瓶
| 产品名称 | 规格 | 货号 |
| BT-549细胞 | T25瓶 | LZ-X968515 |
含量:>1x10^6 细胞数
规格:T25瓶
用途:仅供科研使用。
干冰运输及复苏好存活细胞
(1)1mL冻存管包装干冰运输,收到后-80度冰箱保存过夜后转入液氮或直接复苏,若发现干冰已挥发干净、冻存管瓶盖脱落、破损及细胞有污染,请立即与我们联系。
(2)T25瓶复苏的存活细胞常温发货,收到后按照细胞接收后的处理方法操作。
1) 收到细胞后,75%酒精消毒瓶壁将T25瓶置于37℃培养箱放置约2-3h,若发现培养瓶破损、有液溢出及细胞有污染,请拍照后及时联系我们。
2)请在4或5X显微镜下确认细胞状态,同时给刚收到的细胞拍照(10×,20×)各2-3张以及培养瓶外观照片一张留存,作为售后时收到时细胞状态的依据。
3) 悬浮细胞:T25瓶置于37℃培养箱放置约2-3h,然后抽出瓶中的培养基和细胞1000rpm离心5分钟,弃去上清重悬后接种到新的培养瓶中(加入按照说明书细胞培养条件新配制的完全培养基)。
4)备注:运输用的培养基(灌液培养基)不能再用来培养细胞,请换用按照说明书细胞培养条件新配制的完全培养基来培养细胞。 收到细胞后第一次传代建议T25培养瓶1:2传代 。 一.培养基及培养冻存条件准备:
1) 准备培养基;优质胎牛血清,10%;双抗,1%。备注:该细胞为悬浮并部分聚团生长
2) 培养条件: 气相:空气,95%;二氧化碳,5%。 温度:37摄氏度,培养箱湿度为70%-80%。
3) 冻存液:90%血清,10%DMSO,现用现配。
二. 细胞处理:
1) 冻存细胞的复苏:
将含有1mL细胞悬液的冻存管在37℃水浴中迅速摇晃解冻,加入到含4-6mL完全培养基的离心管中混合均匀。在1000RPM条件下离心3-5min,弃去上清液,完全培养基重悬细胞。然后将细胞悬液加入含6-8ml完全培养基的培养瓶(或皿)中37℃培养过夜。第二天显微镜下观察细胞生长情况和细胞密度。
2) 细胞传代:如果细胞密度达80%-90%,即可进行传代培养。
对于悬浮细胞,传代可参考以下方法:
悬浮状态下生长的细胞,可以通过向培养瓶中添加完全培养基来维持细胞的生长状态,一般情况下细胞密度维持在1×105~1×10^6个/mL(不同细胞对密度要求不同,)可以维持细胞的正常生长。如需分瓶可以将细胞悬液收集到离心管中1000rpm,离心5min,弃去上清,补加1-2mL培养液后重悬混匀后将细胞悬液按1:2的比例分到新T25瓶中,添加6-8ml按照说明书要求配置的新的完全培养基以保持细胞的生长活力,后续传代根据实际情况按1:2~1:5的比例进行。
3) 细胞冻存: 收到细胞后建议在培养前3代时冻存一批细胞种子以备后续实验使用。
下面T25瓶为例;
1. 细胞冻存时按照细胞传代的过程收集消化好的细胞到离心管中,可使用血球计数板计数,来决定细胞的冻存密度。一般细胞的推荐冻存密度为1×10^6~1×107个活细胞/ml.
2. 1000rpm离心3-5min,去掉上清。用配制好的细胞冻存液重悬细胞 ,按每1ml冻存液含1×10^6~1×107个活细胞/ml分配到一个冻存管中将细胞分配到冻存管中,标注好名称、代数、日期等信息。
3. 将要冻存的细胞置于程序降温盒中,-80度冰箱中过夜,之后转入液氮容器中储存。同时记录好冻存管在液氮容器中的位置以便后续查阅和使用。
| WGHL1 白化金黄地鼠肺成纤维样细胞 | 820吩嗪;二本并吡嗪;二本并对二嗪pxen |
| 人真皮微血管内皮细胞完全培养基 100mL | 3Chloro4[(3fluorobenzyl)oxy]aniline 20260 |
| LNCaP clone FGC 人前列腺癌细胞 | 塔宾曲霉 |
| BC3H1(小鼠脑瘤细胞) 5×106cells/瓶×2 | EDTADIwo7iumSALTDIHYDRATE乙二安四乙酸二钠,二水生物技术级白色结晶粉末RTsigma |
| 人肠静脉内皮细胞培养试剂盒胞 人肠静脉内皮细胞培养试剂盒胞 试剂盒 | 葡聚糖凝胶G050毫克2~8℃ |
| SNU-5(人胃癌细胞) 5×106cells/瓶×2 | (化乙锭) |
| CoC1(人癌细胞) 5×106cells/瓶×2 | 葡聚糖T500500u保存:20℃ |
| 大鼠儿茶酚抑素免疫试剂盒 Rat catestatin ELISA Kit | 吸水链霉菌 英文名; Streptomyces hygroscopicus (Jensen) Waksman et Henrici 规格; 冻干粉 破风梭菌 Clostridium tetani (Flugge) Bergey et al. 冻干粉 37℃;24-48h;厌氧; 被孢霉属 Mortierella sp. 模式菌株 no 28℃,5-7天,好氧 |
| VERO-K 非洲绿猴细胞 | L天冬安醋内盐,一水 wo7ium Lcspcrtctq 3702 |
| Sp2/0 小鼠骨髓瘤细胞 1ml/T75 | 乙酸纤维素薄膜/乙酸纤维素膜/纤维素膜/醋纤膜/Cellulose acetate layer sheets 2×8cm 100张 国产/进口 |
| 大鼠钙调蛋白依赖性蛋白激酶激酶(CaMKK)免疫试剂盒 Rat Calmodulin-depende protein kinase kinase,CaMKK ELISA Kit | 二氢钙 Calcium phosphate monobasic,≥% 2 100G 通用试剂 |
| 大鼠肝细胞瘤细胞 英文名称: H-4-II-E | 肉汤琼脂培养基shēng huà shì jì容量:RT,避光250克 |
| BT-549细胞Hep-2, 人喉癌细胞系 | Isomaltooligosaccharide低聚麦芽糖1克AR |
| CLIAKitforVD3ELISAKit大鼠维生素D3规格:48T/96T | IUPAC对录本氧乙酸25克试剂级,99% |
| 淋巴管内皮细胞 1×106 5×106 | 酸钾 Potassium iodate 100G 通用试剂 |
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文献和实验问: A549细胞到底是如何形态?我见过三角形,近乎MDCK细胞形态的,还有的呈长梭形。我感觉自己的细胞好像混进了MDCK细胞。大家帮忙诊断一下,谢谢。 我培养的A549细胞 答1:
我也在养A549细胞,也来讲讲自己的经验,希望大家共同学习。我们主要是看细胞的密度,大概有80-90%铺满培养瓶底就可以传代了,时间长短不一,大概有5-7天吧,一瓶一般传3-4瓶,中间一般会有一次换液的。培养基用的是1640+10%的小牛血清+200u/ml庆大霉素。传代时先倒掉就培养基,然后用PBS洗一两次,然后再用0.25%胰酶消化(100ml培养瓶盖住表面大概要两滴管左右),可镜经下观察细胞间已出现细胞胞质回缩变圆,缝隙变大(我的细胞大概要2min左右),即可倒去消化液,加入培养基,吹打细胞
我养了三种贴壁的细胞,用同样的消化方法,都很好。这三种细胞是A549,ECV304,2BS。1、0.25%胰酶新鲜解冻,不需要预热。2、倒掉培养瓶中的培养基,并用预冷的D-Hank‘s洗两次(要冷,用前4度中取出)。3、加入约1-2ml的胰酶,晃动瓶子,使液体浸润瓶底。4、超净台上放置约1-2分钟(2BS需要的时间更短,约1分钟)5、镜下观察(我一般都省略了,因为每次的效果都很好),见细胞变圆或细胞间隙变大,即可加入含血清的培养基终止消化。(我们的胰酶都不去掉)6、从瓶口到瓶底吹打,可见细胞
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