本试剂盒仅供科研使用
乙酰胆碱酯酶（AChE）活性测定试剂盒说明书
（货号：WS7090W 微板法 96 样）
一、产品简介：
乙酰胆碱酯酶（AChE，EC.3.1.1.7）是生物体内保证神经信号正常传递的关键酶，在
神经传导调节中起重要作用。
乙酰胆碱酯酶催化乙酰胆碱（AChE）水解生成胆碱，胆碱与二硫对硝基*甲酸
（DTNB）作用生成 5-巯基-硝基*甲酸（TNB）；TNB 在 412nm 处有吸收峰，通过测
定 412 nm 吸光度增加速率即可得出 AChE 酶活性大小。
二、试剂盒组成和配置：
试剂名称
规格
保存要求
备注
提取液
液体 100mL×1 瓶
4℃保存
试剂一
液体 20mL×1 瓶
4℃保存
试剂二
粉剂 mg×1 支
4℃保存
用前甩几下使试剂落入底部，再加
1.5mL 乙醇，充分溶解备用。
试剂三
粉剂 mg×2 支
4℃保存
用前甩几下使试剂落入底部，每支再
加 1.2mL 蒸馏水，充分震荡溶解。
三、所需的仪器和用品：
酶标仪、96 孔板、低温离心机、水浴锅、可调式移液枪。
四、乙酰胆碱酯酶（AChE）活性测定：
建议正式实验前选取 2 个样本做预测定，了解本批样品情况，熟悉实验流程，避免实验
样本和试剂浪费！
1、样本制备：
① 组织样本：
称取约 0.1g 组织（水分充足的样本可取 0.5g），加入 1mL 提取液，进行冰浴匀浆。
4℃×12000rpm 离心 10min，取上清，置冰上待测。
【注】：若增加样本量，可按照组织质量（
g）：提取液体积(mL)为 1：5~10 的比例进行提取。
② 细菌/细胞样本：
先收集细菌或细胞到离心管内，离心后弃上清；取约 500 万细菌或细胞加入 1mL
提取液，超声波破碎细菌或细胞（冰浴，功率 200W，超声 3s，间隔 10s，重复 30 次）；
12000rpm 4℃离心 10min，取上清，置冰上待测。
【注】：若增加样本量，可按照细菌/细胞数量（104）：提取液（mL）为 500~1000：1 的比例进行提取。
③ 液体样本：直接检测；若浑浊，离心后取上清检测。
2、上机检测：
① 酶标仪预热 30 min，调节波长到 412 nm。
② 所有试剂可于 37℃水浴中孵育 20min 以上。在 96 孔板中依次加入：
试剂名称（
μL）
测定管
样本
20
试剂一
150
试剂二
10
试剂三
20
混匀，37℃条件下反应，30s 时于 412nm 处读取吸
光值 A1，5min30s 读取 A2，△A=A2-A1。本试剂盒仅供科研使用
2
【注】1.加完试剂三反应即启动；若 A1 值大于 1 或△A 大于 1，可减少样本体积 V1（如由 20μL
减至 10μL，则试剂一相应增加），或减少反应时间 T（如由 5min30s 减至 2min30s 读
A2），则改变后的 V1 和 T 重新代入公式计算。
2.若△A 低于 0.01，可增加样本取样量 W（如 0.2g），或加大样本体积 V1（如由 20μL 增
至 40μL，则试剂一相应减少），或延长反应时间 T（如由 5min30s 增至 15min30s 或更
长读 A2），则改变后的 W 和 V1 和 T 重新代入公式计算。
五、结果计算：
1. 按照蛋白浓度计算：
酶活定义：每毫克蛋白每分钟催化产生 1nmol TNB 的酶量为 1 个酶活单位。
AChE 酶活(nmol/min/mg prot)=(△A÷ε÷d×V2×109)÷(Cpr×V1)÷T=294.12×△A÷Cpr
2. 按照样本质量计算：
酶活定义：每克组织每分钟催化产生 1nmol TNB 的酶量为 1 个酶活单位。
AChE 酶活(nmol/min/g 鲜重)=(△A÷ε÷d×V2×109)÷(W×V1÷V)÷T=294.12×△A÷W
3. 细菌、细胞 AchE 活性：
酶活定义：每 104个细胞每分钟催化产生 1nmol TNB 的酶量为 1 个酶活单位。
AChE 酶活(nmol/min/104 cell)=(△A÷ε÷d×V2×109)÷(500×V1÷V)÷T=0.6×△A
4. 液体中 AchE 活性：
酶活定义：每毫升血清每分钟催化产生 1nmol TNB 的酶量为 1 个酶活单位。
AChE 酶活(nmol/min /mL)=(△A÷ε÷d×V2×109)÷V1÷T=294.12×△A
ε---TNB 摩尔消光系数，13.6×103 L/mol/cm；
d---96 孔板光径，0.5 cm；
V---提取液体积，1 mL；
V1---加入上清液体积，0.02 mL；
V2---反应体系总体积，200μL=2×10-4L；
T---反应时间，5min；
W---样本取样质量，g；
500---细菌或细胞数量，万；
Cpr---蛋白浓度（mg/mL）；建议使用本公司的 BCA 蛋白含量检测试剂盒。
文献和实验
技术资料