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- KA&M-BIO
- 上海
- MZ27828
- 2025年07月11日
企业认证
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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 保存条件：
-20
- 英文名：
pKD4-2×ME-pTRC-mCherry-Mob(低拷贝)
- 库存：
999
- 供应商：
圻明生物
- 规格：
管
1、收到质粒干粉后请先5000rpm离心1min，再加入20μl无菌水溶解质粒，室温放置1min；
2、从-80℃冰箱中取出相应的感受态，置于冰盒上解冻，并做好标记；
3、取2μl质粒加至100μl感受态中，冰浴30min；
4、42℃热激90s，再冰浴2min；
5、加入900μl无抗的LB液体培养基，180rpm震荡培养45min；
6、6000rpm离心5min，仅留100ul上清混匀菌体沉淀；
7、混匀后的菌液加至对应抗性的LB平板上，倒入适量玻璃珠，涂匀液体；
8、将平板正向培养1h，再倒置培养12h~16h；
9、挑取单克隆菌落至对应抗性的LB液体培养基中，震荡培养12h~16h，根据实验需要提取质粒。
pKD4-2×ME-pTRC-mCherry-Mob(低拷贝)圻明公司现货供应，可按客户需求单独构建载体，
一、载体构建：
(1)目的DNA片段和载体的制备；
(2)目的DNA片段和载体的连接；
(3)连接产物的转化；
(4)克隆筛选。
(5)测序验证及目标质粒交付
二、详细内容
1、以PCR扩增为基础的各类载体构建，如大肠杆菌表达载体、酵母表达载体、杆状病毒表达载体、哺乳动物表达载体；报告基因载体等；
2、基因定点突变，包括单点突变，多点突变，基因缺失等；
3、载体元件替换和改造；
4、siRNA载体和miRNA表达载体构建；
5、过表达载体构建。
详询客服。公司整合了国外数个基因库资源，具有以下优势：
种属齐全：人、小鼠、大鼠、其它种属；
数量众多：多达几万数量cDNA克隆（cDNA模板质粒）和ORF克隆（ORF表达质粒）；
质量优异：保证目的基因序列正确，无氨基酸突变，每个克隆质粒均可提供相应的测序报告；
价格实惠：与您亲自调取基因相比，我们的服务让您更加省时、省力、省心；
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文献和实验PKD3 PKD4 PKD13 PKD20 PKD46 PBR322 PCP20 PTrc99a PFastbac1 PFastbacdual
amp我平时用100mg/L 上到150 没问题 你这低拷贝？ 紫藤花笨笨熊 我的载体是pires2-egfp这个貌似是低拷贝的，自己也不大懂。载体抗性是卡那，我用的浓度是30ug/ml。这次摇的目的过表达的浓度才80ng/ul.做不了转染了。不知道提出来的质粒可以重新转化不？还是提高抗生素浓度，再摇菌…… shylook 紫藤花笨笨熊 我的载体是pires2-egfp
。对低拷贝数质粒，提取时可加大菌体用量并加倍使用溶液P1、P2 和 P3，可以有助于增加质粒提取量和提高质粒质量。 13. 溶液使用不当： 溶液 P2、P3 在温度较低时可能出现浑浊，应置于 37℃ 保温片刻直至溶解为清亮的溶液，才能使用。 14. 吸附柱过载： 不同产品中吸附柱吸附能力不同，如果需要提取的质粒量很大，请分多次提取。若用富集培养基，例如 TB 或 2×YT，菌液体积必须减少；若质粒是非常高的拷贝数或宿主菌具有很高的生长率，则需减少 LB 培养液体积。 15. 质粒未全部溶解
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