人肺胰蛋白酶多克隆抗体

多维色谱

为MudPit的系统分离了来自酵母的80S核糖体的胰蛋白酶降解产物。将这些酸化的肽混合物先装进一个强阳离子交换柱(strong cationexchanger，SCX)中，将不连续的洗脱组分载人RP柱，而后将RP的洗脱产物直接载人质谱仪。在SCX柱床逐渐增加盐浓度梯度，而RP珠(采用典型的Cl。)逐渐增大有机溶剂浓度，这个迭代的过程反复处理12次。在全部酵母溶解产物中，MudPit策略能够让人们识别出大约1500个蛋白质(Washburn，Wolters和Yates，2001)。类似的处理过程也曾用于分离

献给初学者：手把手教你做免疫共沉淀实验

一次。 吸出混合物的液体部分。加入 800 μl 的 1 × SDS 胶加样缓冲液到球珠中，煮沸 4 min。 将样品加入到大孔的不连续 SDS-PAGE 梯度胶中，在 10 mA 的恒定电流下电泳过夜。 通过考马斯蓝染色观察蛋白质泳带。 从胶上切下目标带，将其放到微量离心管中，用 1 ml 50% 乙腈洗两次，每次 3 min。 用胰蛋白酶消化胶中的蛋白质，再将肽电洗脱。 通过窄孔高效液相色谱分离肽。将收集的肽在 ABI 477A 或 494A 机器上进行自动 Edman

大鼠心室肌微血管内皮细胞的原代培养

材料和方法 1、仪器： 手术器械一套，倒置显微镜（Leica）,CO2细胞孵育箱（Heraeus），超净工作台（苏州净化设备有限公司），扫描电子显微镜（Hitachi）。 2、主要试剂: DMEM高糖培养基（Gibco），胎牛血清（Hyclone，杭州四季青生物工程材料公司），胰蛋白酶、EDTA（Ameresco）；小鼠