- ￥1910
- wksubio
- WS3280W
- 国内
- 2025年12月10日
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- 详细信息
- 技术资料
- 库存：
大量
- 英文名：
Fructose-1,6-Diphosphatase (FBP) Kit (Visible Colorimetric Method)
- CAS号：
WS3280W
- 保质期：
3个月
- 供应商：
上海瓦兰生物
- 保存条件：
4℃
- 规格：
96T
本试剂盒仅供科研使用
果糖-1,6-二磷酸（酯）酶(Fructose 1,6-bisphosphatase，FBP)
试剂盒说明书
（货号：WS3280W 微板法 96 样）
一、产品简介：
果糖-1,6 二磷酸酶又称果糖 1,6 二磷酸酯酶（FBP，EC 3.1.3.11），是糖异生途径中的关
键酶，不同糖异生底物在多种酶的作用下转化为 1,6 二磷酸果糖，之后在 FBP 催化下水解
为 6 磷酸果糖和无机磷，该酶的异常表达与某些疾病有密切关系。
本试剂盒提供一种简单，灵敏，快速的测定方法：FBP 催化 1,6 二磷酸果糖和水生成 6
磷酸果糖和无机磷，与酶促复合物相互作用，该过程中产生的 NADPH 紧接着与特异的显
色探针反应生成有色物质，通过检测该有色物质的增加速率，进而计算出 FBP 酶活性大小。
二、试剂盒的组成和配制：
试剂名称
规格
保存要求
备注
提取液
液体 100mL×1 瓶
4℃保存
试剂一
粉剂 mg×1 支
4℃保存
用前甩几下或离心使试剂落入底
部，再加 1.1mL 蒸馏水溶解备用。
试剂二
粉剂 mg×1 支
-20℃保存
用前甩几下或离心使试剂落入底
部，再加 1.1mL 蒸馏水溶解备用。
试剂三
液体 1mL×1 支
4℃保存
试剂四
液体 20mL×1 瓶
4℃保存
试剂五
粉剂 mg×1 支
4℃保存
用前甩几下或离心使试剂落入底
部，再加 2.1mL 蒸馏水溶解备用。
标准品
粉剂 mg×1 支
4℃保存
若重新做标曲，则用到该试剂
三、所需的仪器和用品：
酶标仪、96 孔板、恒温水浴锅、台式离心机、可调式移液器、研钵和蒸馏水。
四、果糖-1,6-二磷酸（酯）酶(FBP)活性检测：
建议正式实验前选取 2 个样本做预测定，了解本批样品情况，熟悉实验流程，避免实验
样本和试剂浪费！
1、样本制备：
称取约0.1g样本，加入1mL提取液二进行冰浴匀浆，于4℃，13000rpm离心5min，
取上清液测定。
【注】：若增加样本量，可按照组织质量（
g）：提取液体积(mL)为 1：5~10 的比例进行提取
2、上机检测：
① 酶标仪预热 30min 以上，调节波长至 450nm，设置温度 25℃。
② 试剂解冻至室温（25℃）。
③ 在 96 孔板中依次加入：
试剂名称（μL）
测定管
样本
10
试剂一
10
试剂二
10
试剂三
10
试剂四
140
轻轻混匀，室温（25℃）孵育 5min本试剂盒仅供科研使用
2
试剂五
20
混匀，于 450nm 处测定，1min 时读取 A1，15min
后读取 A2，ΔA=A2-A1。
【注】1.若ΔA 在零附近徘徊，可以延长反应时间 T（如增至 25min 后重新读取 A2），则改
变后的反应时间 T 需重新代入计算公式计算。
2. 若样本含有高的背景值，做测定管时候可以增设一个样本自身对照，即 20μL 试剂
五换成 20μL 蒸馏水，其他试剂照加，则ΔA=ΔA 测定-ΔA 对照。
五、结果计算：
1、标准曲线方程：y = 0.1104x + 0.0005，x 是标准品摩尔质量（nmol），y 是△A。
2、按样本蛋白蛋白浓度计算
酶活定义：每毫克组织蛋白每分钟催化产生 1nmol NADPH 定义为一个酶活性单位。
FBP（nmol/min /mg prot）=[（ΔA-0.0005）÷0.1104]÷(V1×Cpr) ÷T
=60.4×（ΔA-0.0005）÷Cpr
3、按照样本鲜重计算
酶活定义：每克组织每分钟催化产生 1nmol NADPH 定义为一个酶活力单位。
FBP（nmol/min /g 鲜重）＝[（ΔA-0.0005）÷0.1104]÷（W ×V1÷V）÷T
=60.4×（ΔA-0.0005）÷W
V---加入提取液体积，1mL；
V1---加入样本体积，0.01mL；
T---反应时间，15min；
W---样本质量，g；
Cpr---样本蛋白质浓度，mg/mL；建议使用本公司的 BCA 蛋白含量检测试剂盒。
附：标准曲线制作过程：
1 制备标准品母液（1nmol/μL）：向标准品 EP 管里面加入 0.6mL 蒸馏水（母液需在两
天内用且-20℃保存）。
2 把母液稀释成六个浓度梯度的标准品：0, 0.2, 0.4, 0.6, 0.8, 1. nmol/μL。也可根据实际
样本来调整标准品浓度。
3 10μL 标准品+10μL 试剂三+40μL 蒸馏水+140μL 试剂四，450nm 读取吸光值 A。根
据结果即可制作标准曲线。
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果糖-1,6-二磷酸酶(FBP)试剂盒(可见显色法),微板法
￥1910
