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果糖-1,6-二磷酸酶(FBP)试剂盒(可见显色法)

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  • ￥1010
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  • WS3280F
  • 国内
  • 2025年12月10日
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    • 英文名：

      Fructose-1,6-Diphosphatase (FBP) Kit (Visible Colorimetric Method)

    • CAS号：

      WS3280F

    • 保质期：

      3个月

    • 供应商：

      上海瓦兰生物

    • 保存条件：

      4℃

    • 规格：

      48T

    本试剂盒仅供科研使用
    果糖-1,6-二磷酸（酯）酶(Fructose 1,6-bisphosphatase，FBP)
    试剂盒说明书
    （货号：WS3280F 分光法 48 样）
    一、产品简介：
    果糖-1,6 二磷酸酶又称果糖 1,6 二磷酸酯酶（FBP，EC 3.1.3.11），是糖异生途径中的关
    键酶，不同糖异生底物在多种酶的作用下转化为 1,6 二磷酸果糖，之后在 FBP 催化下水解
    为 6 磷酸果糖和无机磷，该酶的异常表达与某些疾病有密切关系。
    本试剂盒提供一种简单，灵敏，快速的测定方法：FBP 催化 1,6 二磷酸果糖和水生成 6
    磷酸果糖和无机磷，与酶促复合物相互作用，该过程中产生的 NADPH 紧接着与特异的显
    色探针反应生成有色物质，通过检测该有色物质的增加速率，进而计算出 FBP 酶活性大小。
    二、试剂盒的组成和配制：
    试剂名称
    规格
    保存要求
    备注
    提取液
    液体 60mL×1 瓶
    4℃保存
    试剂一
    粉剂 mg×1 支
    4℃保存
    用前甩几下或离心使试剂落入底
    部，再加 2.1mL 蒸馏水溶解备用。
    试剂二
    粉剂 mg×1 支
    -20℃保存
    用前甩几下或离心使试剂落入底
    部，再加 2.1mL 蒸馏水溶解备用。
    试剂三
    液体 2mL×1 支
    4℃保存
    试剂四
    液体 30mL×1 瓶
    4℃保存
    试剂五
    粉剂 mg×1 瓶
    4℃保存
    用前甩几下或离心使试剂落入底
    部，再加 4.2mL 蒸馏水溶解备用。
    标准品
    粉剂 mg×1 支
    4℃保存
    若重新做标曲，则用到该试剂
    三、所需的仪器和用品：
    可见分光光度计、1mL 玻璃比色皿（光径 1cm）、恒温水浴锅、台式离心机、可调式
    移液器、研钵和蒸馏水。
    四、果糖-1,6-二磷酸（酯）酶(FBP)活性检测：
    建议正式实验前选取 2 个样本做预测定，了解本批样品情况，熟悉实验流程，避免实验
    样本和试剂浪费！
    1、样本制备：
    称取约0.1g样本，加入1mL提取液进行冰浴匀浆，于4℃，12000rpm离心5min，
    取上清液测定。
    2、上机检测：
    ① 可见分光光度计预热 30min 以上，调节波长至 450nm，设置温度 25℃，蒸馏水调零。
    ② 试剂解冻至室温（25℃）。
    ③ 在 1mL 玻璃比色皿中依次加入：
    试剂名称（μL）
    测定管
    样本
    40
    试剂一
    40
    试剂二
    40
    试剂三
    40
    试剂四
    500
    轻轻混匀，室温（25℃）孵育 10min本试剂盒仅供科研使用
    2
    试剂五
    80
    混匀，于 450nm 处测定，1min 时读取 A1，15min
    后读取 A2，ΔA=A2-A1。
    【注】1.若ΔA 在零附近徘徊，可以延长反应时间 T（如增至 25min 后重新读取 A2），则改
    变后的反应时间 T 需重新代入计算公式计算。
    2. 若样本含有高的背景值，做测定管时候可以增设一个样本自身对照，即 80μL 试剂
    五换成 80μL 蒸馏水，其他试剂照加，则ΔA=ΔA 测定-ΔA 对照。
    五、结果计算：
    1、标准曲线方程：y = 0.0454x + 0.0026，x 是标准品摩尔质量（nmol），y 是△A。
    2、按样本蛋白蛋白浓度计算
    酶活定义：每毫克组织蛋白每分钟催化产生 1nmol NADPH 定义为一个酶活性单位。
    FBP（nmol/min /mg prot）=[（ΔA-0.0026）÷0.0454]÷(V1×Cpr) ÷T
    =36.7×（ΔA-0.0026）÷Cpr
    3、按照样本鲜重计算
    酶活定义：每克组织每分钟催化产生 1nmol NADPH 定义为一个酶活力单位。
    FBP（nmol/min /g 鲜重）＝[（ΔA-0.0026）÷0.0454]÷（W ×V1÷V）÷T
    =36.7×（ΔA-0.0026）÷W
    V---加入提取液体积，1mL；
    V1---加入样本体积，0.04mL；
    T---反应时间，15min；
    W---样本质量，g；
    Cpr---样本蛋白质浓度，mg/mL；建议使用本公司的 BCA 蛋白含量检测试剂盒。
    附：标准曲线制作过程：
    1 制备标准品母液（1nmol/μL）：向标准品 EP 管里面加入 0.6mL 蒸馏水（母液需在两
    天内用且-20℃保存）。
    2 把母液稀释成六个浓度梯度的标准品：0, 0.2, 0.4, 0.6, 0.8, 1. nmol/μL。也可根据实际
    样本来调整标准品浓度。
    3 40μL 标准品+40μL 试剂三+160μL 蒸馏水+500μL 试剂四，450nm 读取吸光值 A。根
    据结果即可制作标准曲线。

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