本试剂盒仅供科研使用
葡萄糖激酶(glucokinase，GK)活性测定试剂盒说明书
(货号：WS9780F 紫外分光法 48 样)
一、产品简介：
葡萄糖激酶（GK，EC 2.7.1.2）是己糖激酶家族中的一员，主要存在于成熟的肝细胞
和胰岛细胞中。在正常的生理条件下，GK 的主要作用是监控血中葡萄糖水平。
葡萄糖激酶(GK)磷酸化葡萄糖并产生 6-磷酸葡萄糖，该产物进一步与 6-磷酸葡萄糖
脱氢酶和 NADP+偶联，在 340 nm 测 NADPH 光吸收增加量，进而计算出该酶活性大小。
二、试剂盒的组成和配制：
试剂名称
规格试剂名称 保存要求
备注
提取液
液体 60mL×1 瓶
4℃保存
试剂一
液体 40mL×1 瓶
4℃保存
试剂二
粉剂μg×1 支
-20℃保存 部，再加 临用前甩几下或离心使粉剂落入底
2.2mL 的蒸馏水溶解备用。
试剂三
粉体 mg×1 瓶
4℃保存
临用前甩几下或离心使粉剂落入底
部，再加 36mL 的试剂一溶解备用。
三、所需的仪器和用品：
紫外分光光度计、1mL 石英比色皿（光径 1cm）、恒温水浴锅、台式离心机、可调式
移液器、研钵、冰和蒸馏水。
四、葡萄糖激酶(GK)活性测定：
建议正式实验前选取 2 个样本做预测定，了解本批样品情况，熟悉实验流程，避免实验
样本和试剂浪费！
1、样本制备：
① 组织样本：
称取约 0.1g 组织，加入 1mL 提取液，进行冰浴匀浆。12000rpm，4℃离心 10min，取
上清，置冰上待测。
【注】：若增加样本量，可以按照组织质量（
g）：提取液体积(mL)为 1：5~10 的比例提取。
② 细菌/细胞样本：
先收集细菌或细胞到离心管内，离心后弃上清；取 500 万细菌或细胞加入 1mL 提取
液；冰浴超声波破碎细菌或细胞（冰浴，功率 20％或 200W，超声 3s，间隔 10s，重复
30 次）；12000rpm，4℃离心 10min，取上清，置冰上待测。
【注】：若增加样本量，可按照细菌或细胞数量（104 个）：提取液体积（mL）为 500~1000：1 的比
例进行提取。
③ 液体样本：直接检测。若浑浊，离心后取上清检测。
2、上机检测：
① 紫外分光光度计预热 30min 以上，调节波长至 340nm，蒸馏水调零。
② 配置好的试剂二和三在 25℃预热 5min 至室温；
③ 在 1mL 石英比色皿（光径 1cm）中依次加入：
试剂（
μL）
测定管
样本
80
试剂二
40
试剂三
680
混匀，1min 时于 340nm 处读取吸光值 A1，
21min（即 20min 后）读取 A2，△A=A2-A1。本试剂盒仅供科研使用
2
【注】1.若△A 的值在零附近，可以适当延长反应时间到 30min 或更长读取 A2，改变后
的反应时间需代入计算公式重新计算。或适当加大样本量，则改变后的加样体积
V1 需代入计算公式重新计算。
2. 若上升趋势不稳定，可以每隔 10S 读取一次吸光值，选取一段线性上升的时间
段来参与计算，相对应的 A 值也代入计算公式重新计算。
五、结果计算：
1、按样本蛋白浓度计算
单位定义：每毫克组织蛋白每分钟生成 1 nmol 的 NADPH 定义为一个酶活力单位。
葡萄糖激酶(GK) (nmol/min/mg prot)=[ΔA÷(ε×d)×V2×109]÷(V1×Cpr) ÷T=80.4×ΔA÷Cpr
2、按样本鲜重计算
单位定义：每 g 组织每分钟生成 1 nmol 的 NADPH 定义为一个酶活力单位。
葡萄糖激酶(GK) (nmol/min/g 鲜重)=[ΔA÷(ε×d)×V2×109]÷(W× V1÷V) ÷T=80.4×ΔA÷W
3、按细菌或细胞密度计算
单位定义：每 1 万个细菌或细胞每分钟生成 1 nmol 的 NADPH 定义为一个酶活力单位。
葡萄糖激酶(GK) (nmol/min/104 cell)=[ΔA÷(ε×d)×V2×109]÷(500×V1÷V)÷T=0.16×ΔA
4、按液体体积计算
单位定义：每毫升液体在每分钟生成 1 nmol 的 NADPH 定义为一个酶活力单位。
葡萄糖激酶(GK) (nmol/min/mL)=[ΔA×V 反总÷(ε×d)×109]÷V1÷T=80.4×ΔA
ε---NADPH 摩尔消光系数，6.22×103 L / mol /cm； d---1mL 石英比色皿，1cm；
V---加入提取液体积，1 mL；
V1---加入样本体积，0.08mL；
V2---反应体系总体积，8×10-4 L；
T---反应时间，20min；
W---样本质量，g；
500---细菌或细胞总数，500 万；
Cpr---样本蛋白质浓度，mg/mL；建议使用本公司的 BCA 蛋白含量检测试剂盒。
文献和实验
