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葡萄糖激酶(GK)试剂盒,微板法

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  • ￥1090
  • wksubio
  • WS9780W
  • 国内
  • 2025年07月16日
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    • 英文名：

      Glucokinase (GK) Kit

    • CAS号：

      WS9780W

    • 保质期：

      3个月

    • 供应商：

      上海瓦兰生物

    • 保存条件：

      4℃

    • 规格：

      96T

    本试剂盒仅供科研使用
    葡萄糖激酶(glucokinase，GK)活性测定试剂盒说明书
    (货号：WS9780W 微板法 96 样)
    一、产品简介：
    葡萄糖激酶（GK，EC 2.7.1.2）是己糖激酶家族中的一员，主要存在于成熟的肝细胞
    和胰岛细胞中。在正常的生理条件下，GK 的主要作用是监控血中葡萄糖水平。
    葡萄糖激酶(GK)磷酸化葡萄糖并产生 6-磷酸葡萄糖，该产物进一步与 6-磷酸葡萄糖
    脱氢酶和 NADP+偶联，在 340 nm 测 NADPH 光吸收增加量，进而计算出该酶活性大小。
    二、试剂盒的组成和配制：
    试剂名称
    规格试剂名称 保存要求
    备注
    提取液
    液体 120mL×1 瓶
    4℃保存
    试剂一
    液体 20mL×1 瓶
    4℃保存
    试剂二
    粉剂μg×1 支
    -20℃保存
    临用前甩几下或离心使粉剂落入底部，
    再加 1.1mL 蒸馏水溶解备用。
    试剂三
    粉剂 mg×1 瓶
    4℃保存
    临用前甩几下或离心使粉剂落入底部，
    再加 18mL 试剂一溶解备用。
    三、所需的仪器和用品：
    酶标仪、96 孔板、恒温水浴锅、台式离心机、可调式移液器、研钵、冰和蒸馏水。
    四、葡萄糖激酶(GK)活性测定：
    建议正式实验前选取 2 个样本做预测定，了解本批样品情况，熟悉实验流程，避免实验
    样本和试剂浪费！
    1、样本制备：
    ① 组织样本：
    称取约 0.1g 组织，加入 1mL 提取液，进行冰浴匀浆。12000rpm，4℃离心 10min，取
    上清，置冰上待测。
    【注】：若增加样本量，可以按照组织质量（
    g）：提取液体积(mL)为 1：5~10 的比例提取。
    ② 细菌/细胞样本：
    先收集细菌或细胞到离心管内，离心后弃上清；取 500 万细菌或细胞加入 1mL 提取液；
    冰浴超声波破碎细菌或细胞（冰浴，功率 20％或 200W，超声 3s，间隔 10s，重复 30 次）；
    12000rpm，4℃离心 10min，取上清，置冰上待测。
    【注】：若增加样本量，可按照细菌或细胞数量（104个）：提取液体积（mL）为 500~1000：1 的比例
    进行提取。
    ③ 液体样本：直接检测。若浑浊，离心后取上清检测。
    2、上机检测：
    ① 酶标仪预热 30min 以上，调节波长至 340nm。
    ② 配置好的试剂二和三在 25℃预热 5min 至室温；
    ③ 在 96 孔板中依次加入：
    试剂（
    μL）
    测定管
    样本
    20
    试剂二
    10
    试剂三
    170
    混匀，1min 时于 340nm 处读取吸光值 A1，
    21min（即 20min 后）读取 A2，△A=A2-A1。
    【注】1.若△A 的值在零附近，可以适当延长反应时间到 30min 或更长读取 A2，改变后本试剂盒仅供科研使用
    2
    的反应时间需代入计算公式重新计算。或适当加大样本量，则改变后的加样体
    积 V1 需代入计算公式重新计算。
    2. 若上升趋势不稳定，可以每隔 10S 读取一次吸光值，选取一段线性上升的时间
    段来参与计算，相对应的 A 值也代入计算公式重新计算。
    五、结果计算：
    1、按样本蛋白浓度计算
    单位定义：每毫克组织蛋白每分钟生成 1 nmol 的 NADPH 定义为一个酶活力单位。
    葡萄糖激酶(GK)（nmol/min/mg prot）=[ΔA÷（ε×d）×V2×109]÷(V1×Cpr) ÷T=160.77×ΔA÷Cpr
    2、按样本鲜重计算
    单位定义：每 g 组织每分钟生成 1 nmol 的 NADPH 定义为一个酶活力单位。
    葡萄糖激酶(GK)（nmol/min/g 鲜重）=[ΔA÷（ε×d）×V2×109]÷(W×V1÷V) ÷T=160.77×ΔA÷W
    3、按细菌或细胞密度计算
    单位定义：每 1 万个细菌或细胞每分钟生成 1 nmol 的 NADPH 定义为一个酶活力单位。
    葡萄糖激酶(GK)(nmol/min/104 cell)=[ΔA÷(ε×d)×V2×109]÷(500×V1÷V)÷T=0.32×ΔA
    4、按液体体积计算
    单位定义：每毫升液体在每分钟生成 1 nmol 的 NADPH 定义为一个酶活力单位。
    葡萄糖激酶(GK)(nmol/min/mL)=[ΔA×V 反总÷(ε×d)×109]÷V1÷T=160.77×ΔA
    ε---NADPH 摩尔消光系数，6.22×103 L / mol /cm； d---96 孔板光径，0.5cm；
    V---加入提取液体积，1 mL；
    V1---加入样本体积，0.02 mL；
    V2---反应体系总体积，2×10-4 L；
    T---反应时间，20min；
    W---样本质量，g；
    500---细菌或细胞总数，500 万；
    Cpr---样本蛋白质浓度，mg/mL；建议使用本公司的 BCA 蛋白含量检测试剂盒。

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        上海西唐生物科技有限公司   021-55229872,  65333639   www.westang.com 人葡萄糖激酶 (Glucokinase)ELISA 试剂盒   ( 用于血清、血浆、细胞培养上清液和其它生物体液内 )   原理 本实验采用双抗体夹心  ABC-ELISA 法。用抗人   Glucokinase   单抗包被于酶标板上，标准品和样品中的   Glucokinase

    • 糖酵解途径

      ，Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ型主要存在于肝外组织，其对葡萄糖Km值为10-5～10-6M。 Ⅳ型主要存在于肝脏，特称葡萄糖激酶(glucokinase,GK)，对葡萄糖的Km值1～10-2M，正常血糖浓度为5mmol/L，当血糖浓度升高时，GK活性增加，葡萄糖和胰岛素能诱导肝脏合成GK，GK能催化葡萄糖、甘露糖生成其6-磷酸酯，6-磷酸葡萄糖对此酶无抑制作用。 HK与GK两者区别见表4-1。� 表4-1　己糖激酶(HK)和葡萄糖激酶(GK)的区别

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