本试剂盒仅供科研使用
丙*酸脱羧酶（pyruvate decarboxylase,PDC）活性测定试剂盒说明书
（货号：WS5380W 微板法 96 样）
一、产品简介：
丙*酸脱羧酶（PDC，EC4.1.1.1）。是乙醇发酵的关键酶之一，催化*酮酸脱羧生成
乙醛，存在于酵母和植物体中。
PDC 催化*酮酸脱羧生成乙醛，乙醇脱氢酶进一步催化 NADH 还原乙醛生成乙醇和
NAD+；通过测定 NADH 在 340 nm 处的光吸收下降速率，即可得到 PDC 酶活性大小。
二、试剂盒的组成和配制：
试剂名称
规格
保存要求
备注
提取液
液体 120mL×1 瓶
4℃保存
试剂一
液体 16mL×1 瓶
4℃保存
试剂二
粉体 mg×1 支
4℃保存
用前甩几下使试剂落入底部，再
加 1.1mL 蒸馏水混匀备用。
试剂三
粉体 mg×2 支
-20℃保存
用前甩几下使试剂落入底部，每
支加 0.55mL 蒸馏水混匀备用，用
不完的试剂分装后-20℃保存，禁
止反复冻融，三天内用完。
试剂四
液体μL×1 支
-20℃保存
用前甩几下使试剂落入底部，再
加 1.1mL 蒸馏水混匀备用。
三、所需的仪器和用品：
酶标仪、96 孔板、水浴锅、台式离心机、可调式移液器、研钵、冰和蒸馏水。
四、丙*酸脱羧酶（PDC）活性测定：
建议正式实验前选取 2 个样本做预测定，了解本批样品情况，熟悉实验流程，避免实验
样本和试剂浪费！
1、样本制备：
① 组织样本：
称取约 0.1g 组织，加入 1mL 提取液，进行冰浴匀浆。12000grrpm，4℃离心 10min，
取上清，置冰上待测。
【注】：若增加样本量，可按照组织质量（
g）：提取液体积(mL)为 1：5~10 的比例进行提取。
② 细菌/细胞样本：
先收集细菌或细胞到离心管内，离心后弃上清；取 500 万细菌或细胞加入 1mL 提取液；
冰浴超声波破碎细菌或细胞（冰浴，功率 20％或 200W，超声 3s，间隔 10s，重复 30 次）；
12000rpm，4℃离心 10min，取上清，置冰上待测。
【注】：若增加样本量，可按照细菌/细胞数量（104个）：提取液（mL）为 1:1000~5000 比例进行提取。
2、上机检测：
① 酶标仪预热 30min 以上，调节波长至 340nm。
② 所有试剂解冻至室温（25℃）。
② 依次在 96 孔板中加入：
试剂名称（μL）
测定管
样本
10
试剂一
160
试剂二
10本试剂盒仅供科研使用
2
试剂三
10
试剂四
10
混匀，30℃条件下，10S时于340nm处读取A1，10min
后读取 A2。△A= A1-A2。
【注】1.若△A 的值在零附近，可以适当延长反应时间到 30min 或更长读取 A2，改变后的反应时间
需代入计算公式重新计算。或适当加大样本量，则改变后的加样体积需代入计算公式
重新计算。
2. 若起始值 A 太大如超过 2（如颜色较深的植物叶片，一般色素较高，则起始值相对会偏
高），可以适当减少样本加样量，则改变后的加样体积需代入计算公式重新计算。
或向待测样本中加少许活性炭混匀静置 5min 后 12000rpm, 4℃离心 10min，上清液用于
检测；
3. 若下降趋势不稳定，可以每隔 10S 读取一次吸光值，选取一段线性下降的时间段来参
与计算，相对应的 A 值也代入计算公式重新计算。
五、结果计算：
1、按照蛋白浓度计算
酶活定义：30℃条件下，每毫克蛋白每分钟氧化 1nmol NADH 为 1 个酶活单位。
PDC (nmol/min/mg prot) =[△A÷ε÷d×V2×109]÷(Cpr×V1) ÷T
=643.1×△A÷Cpr
2、按照样本质量计算
酶活定义：30℃条件下，每克组织每分钟氧化 1nmol NADH 为 1 个酶活单位。
PDC (nmol/min /g 鲜重) =[△A÷ε÷d×V2×109]÷(W×V1÷V) ÷T
=643.1×△A÷W
3、按细胞数量计算
酶活定义：30℃条件下，每 104个细胞每分钟氧化 1nmol NADH 为 1 个酶活单位。
PDC (nmol/min/104cell) =[△A÷ε÷d×V2×109]÷(细胞数量×V1÷V) ÷T
=643.1×△A÷细胞数量
4、按液体体积计算
酶活定义：30℃条件下，每毫升液体每分钟氧化 1nmol NADH 为 1 个酶活单位。
PDC (nmol/min /mL) =[△A÷ε÷d×V2×109]÷V1÷T
=643.1×△A
ε---NADH 摩尔消光系数，6.22×103L/mol/cm；
d---比色皿光径，0.5cm；
V：加入提取液体积，1mL；
V1---反应体系中上清液体积，0.01mL；
V2---反应体系总体积，0.2mL=2×10-4 L，
W---样本质量，g ；
T：反应时间，10 min；
细胞数量：500 万；
Cpr：蛋白浓度（mg/mL），建议使用本公司 BCA 蛋白质含量试剂盒。
文献和实验
