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乙醇脱氢酶(ADH)试剂盒（紫外法）

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  • ￥320
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  • WS4780F
  • 国内
  • 2026年04月02日
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    • 英文名：

      Ethanol Dehydrogenase (ADH) Kit (UV Method)

    • CAS号：

      WS4780F

    • 保质期：

      3个月

    • 供应商：

      上海瓦兰生物

    • 保存条件：

      4℃

    • 规格：

      48T

    本试剂盒仅供科研使用
    乙醇脱氢酶(Alcohol dehydrogenase, ADH)试剂盒说明书
    (货号：WS4780F 分光法 48 样)
    一、产品简介：
    乙醇脱氢酶(ADH，EC 1.1.1.1)存在于许多生物体中，在人类和许多其他动物中，能分解
    有毒的醇类; 在酵母和许多细菌中，一些醇脱氢酶催化的逆反应作为发酵的一部分。
    本试剂盒利用乙醇脱氢酶催化乙醛和 NADH 生成乙醇和 NAD+，通过检测 NADH 在
    340nm 的下降速率，进而计算出乙醇脱氢酶活性的大小。
    二、试剂盒组成和配制：
    试剂名称
    规格
    保存要求
    备注
    提取液
    液体 60mL×1 瓶
    4℃保存
    试剂一
    粉剂 mg×3 支
    -20℃保存
    用前甩几下或离心使试剂落入底
    部
    ，再加 0.55mL 蒸馏水溶解
    ，用
    不完的试剂分装后
    -20℃保存，禁
    止反复冻融，三天内用完。
    试剂二
    液体 26mL×1 瓶
    4℃保存
    试剂三
    液体 1.5mL×2 支
    4℃保存
    三、所需的仪器和用品：
    紫外分光光度计、1mL 石英比色皿（光径 1cm）、台式离心机、可调式移液器、研钵、
    冰和蒸馏水。
    四、乙醇脱氢酶(ADH)活性测定：
    建议正式实验前选取 2 个样本做预测定，了解本批样品情况，熟悉实验流程，避免实验
    样本和试剂浪费！
    1、样本制备：
    ① 组织样本：
    建议称取约 0.1g 组织，加入 1mL 提取液，进行冰浴匀浆。12000rpm, 4℃离心 10min，
    取上清，置冰上待测。
    【注】：若增加样本量，可按照组织质量（
    g）：提取液体积(mL)为 1：5~10 的比例进行提取
    ② 细菌/培养细胞：先收集细菌或细胞到离心管内，离心后弃上清；按照细菌或细胞数
    量（104个）：建议 500 万细菌或细胞加入 1mL 提取液，超声波破碎细菌或细胞（冰浴，
    功率 20％或 200W，超声 3s，间隔 10s，重复 30 次）；12000rpm, 4℃离心 10min，取上
    清，置冰上待测。
    【注】：若增加样本量，可按照数量（104 个）：提取液体积为 500~1000：1 的比例进行提取
    ③ 液体样本：直接检测。若浑浊，离心后取上清检测。
    2、上机检测：
    ① 紫外分光光度计预热 30min 以上，调节波长至 340nm，蒸馏水调零。
    ② 试剂放在 37℃水浴 5min；
    ③ 在 1mL 石英比色皿（光径 1cm）中按照下表依次加入试剂：
    试剂名称（
    μL）
    测定管
    样本
    120
    试剂一
    30
    试剂二
    510
    试剂三
    60
    混匀，立即于 340nm 下读取 A1 值，室温
    （25℃）下，5min 后读取 A2 值。ΔA=A1-A2。本试剂盒仅供科研使用
    2
    【注】：1. 若ΔA 过小，可增加样本体积 V1（如增至 160μL，则试剂二相应减少），或延长
    反应时间 T（如：10min 或更长），重新调整后的样本体积 V1 和反应时间 T 需
    代入计算公式重新计算。
    2. 若ΔA 的值大于 0.3，需减少样本体积 V1（如减至 80μL，则试剂二相应增加），
    或缩短反应时间 T（如：2min 或更短），重新调整后的样本体积 V1 和反应时间
    T 需代入计算公式重新计算。
    五、结果计算：
    1、按样本蛋白浓度计算：
    酶活定义：每毫克组织蛋白每分钟消耗 1nmol NADH 的酶量为 1 个酶活单位。
    ADH(nmol/min/mg prot)=[ΔA÷(ε×d)×109×V2]÷(V1×Cpr) ÷T=192.93×ΔA÷Cpr
    2、按样本鲜重计算：
    酶活定义：每克组织每分钟消耗 1 nmol NADH 的酶量为 1 个酶活单位。
    ADH(nmol/min/g 鲜重)=[ΔA÷(ε×d)×109×V2]÷(W×V1÷V)÷T=192.93×ΔA÷W
    3、按细菌/细胞密度计算：
    酶活定义：每 1 万个细菌/细胞每分钟消耗 1 nmol NADH 的酶量为 1 个酶活单位。
    ADH(nmol/min/104 cell)=[ΔA×V2÷(ε×d)×109]÷(500×V1÷V)÷T=0.39×ΔA
    4、按液体体积计算：
    酶活定义：每毫升液体样本每分钟消耗 1nmol NADH 的酶量为 1 个酶活单位。
    ADH 酶活(nmol/min/mL)=[ΔA×V2÷(ε×d)×109]÷V1÷T=192.93×ΔA
    V1---加入样本体积，0.12mL；
    V---加入提取液体积，1mL；
    V2---反应体系总体积，7.2×10-4 L；
    d---光径，1cm；
    500----细菌或细胞总数，500 万；
    W---样本质量，g；
    ε---NADH 摩尔消光系数，6.22×103 L/mol/cm；
    T---反应时间，5min；
    Cpr---蛋白质浓度，mg/mL，建议使用本公司的 BCA 蛋白含量检测试剂盒。

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