NAD-苹果酸酶(NAD-ME)试剂盒产品图

NAD-苹果酸酶(NAD-ME)试剂盒

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  • ￥420
  • wksubio
  • WS9180F
  • 国内
  • 2026年08月06日
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    • 英文名：

      NAD-Malase (NAD-ME) Kit

    • CAS号：

      WS9180F

    • 保质期：

      3个月

    • 供应商：

      上海瓦兰生物

    • 保存条件：

      4℃

    • 规格：

      48T

    本试剂盒仅供科研使用
    NAD-苹果酸酶（Malic enzyme , NAD-ME）试剂盒说明书
    （货号：WS9180F 分光法 48 样）
    一、产品简介：
    苹果酸酶是生物体内重要的酶之一，广泛存在于动物、植物、细菌体中。是苹果酸代谢的
    关键酶。近年来植物 ME 活性测定较多，已经成为抗氧化研究的热点。该酶发挥作用需要辅
    酶因子的参与，依据辅酶因子的不同，分为 NAD-ME(EC 1.1.1.38)和 NADP-ME(EC 1.1.1.40)。
    ME 的主要功能是催化苹果酸氧化脱羧产生丙*酸和 CO2，以及伴随 NAD(P)+的还原反应，
    NADP-ME 催化 NAD+还原成 NADH，本试剂盒通过检测 NADH 在 340nm 处的增加速率即
    可得出 NAD-ME 的酶活性大小。
    二、试剂盒的组成和配制：
    试剂名称
    规格
    保存要求
    备注
    提取液
    液体 50mL×1 瓶
    4℃保存
    试剂一
    粉剂 mg×1 支
    -20℃保存 用前甩几下或离心使试剂落入 底部，再加
    1.2mL 蒸馏水溶解。
    试剂二
    粉剂 mg×1 支
    4℃保存
    用前甩几下或离心使试剂落入
    底部，再加 1.2mL 蒸馏水溶解。
    试剂三
    粉剂 mg×1 支
    4℃保存
    用前甩几下或离心使试剂落入
    底部，再加 1.2mL 蒸馏水溶解。
    试剂四
    液体 40mL×1 瓶
    4℃保存
    试剂五
    粉剂 mg×1 支
    4℃保存
    用前甩几下或离心使试剂落入
    底部，再加 1.2mL 蒸馏水溶解。
    三、所需的仪器和用品：
    可见分光光度计、1mL 玻璃比色皿（光径 1cm）、水浴锅、台式离心机、可调式移液
    器、蒸馏水。
    四、NAD-苹果酸酶（NAD-ME）活性测定：
    建议正式实验前选取 2 个样本做预测定，了解本批样品情况，熟悉实验流程，避免实验
    样本和试剂浪费！
    1、样本制备：
    ① 组织样本：
    称取约 0.1g 组织，加入 1mL 提取液，进行冰浴匀浆。12000rpm，4℃离心 10min，
    取上清，置冰上待测。
    【注】：按照组织质量（
    g）：提取液体积(mL)为 1：5~10 的比例。
    ② 细菌/培养细胞：先收集细菌或细胞到离心管内，离心后弃上清；取约 500 万细菌或
    细胞加入 1mL 提取液，超声波破碎细菌或细胞（冰浴，功率 20％或 200W，超声
    3s，间隔 10s，重复 30 次）；12000rpm，4℃离心 10min，取上清，置冰上待测。
    【注】：若增加样本量，可按细菌/细胞数量（104个）：提取液（mL）为 1000~5000：1 的比例进行提取
    3
    液体样品：直接检测。若浑浊，离心后取上清检测。
    2、上机检测：
    ① 可见分光光度计预热 30min 以上，调节波长至 340nm，蒸馏水调零。
    ② 所有试剂放在 25℃水浴 10min；
    ③ 试剂二、三和四可按照操作表加样体系以 20:20：680 的比例混合，一次性取出 720μL。
    ④ 在 1mL 玻璃比色皿中依次加入：本试剂盒仅供科研使用
    2
    试剂名称（μL）
    测定管
    样本
    40
    试剂一
    20
    试剂二
    20
    试剂三
    20
    试剂四
    680
    试剂五
    20
    混匀，立即于 340nm 下读取 A1 值，室温
    （25℃）下，3min 后读取 A2 值。ΔA=A2-A1。
    【注】若ΔA 过小，可以延长反应时间 T（如：10min 或更长），或增加样本上样量 V1（如
    增至 60μL，则试剂四相应减少），重新调整的 T 或 V1 需代入计算公式重新计算。
    五、结果计算：
    1、按样本蛋白浓度计算：
    酶活定义：25℃条件下，每毫克组织蛋白每分钟生成 1 nmol NADH 定义为一个酶活单位。
    NAD-ME(nmol/min/mg prot)=[ΔA÷(ε×d) ×V2×109]÷(Cpr×V1)÷T
    =1071.8×ΔA÷Cpr
    3、按样本鲜重计算：
    酶活定义：25℃条件下，每克组织每分钟生成 1 nmol NADH 定义为一个酶活单位。
    NAD-ME(nmol/min/g 鲜重)=[ΔA÷(ε×d) ×V2×109]÷(W×V1÷V)÷T
    =1071.8×ΔA÷W
    4、按细菌/细胞密度计算：
    酶活定义：25℃条件下，每 1 万个细菌/细胞每分钟生成 1 nmol NADH 定义为一个酶活单位。
    NAD-ME(nmol/min/104 cell)=[ΔA÷(ε×d) ×V2×109]÷(V1÷V×500)÷T=2.14×ΔA
    5、按照液体体积计算：
    酶活定义：25℃条件下，每毫升液体每分钟生成 1nmol NADH 定义为一个酶活单位。
    NAD-ME(nmol/min/104 cell)=[ΔA÷(ε×d) ×V2×109]÷V1÷T=1071.8×ΔA
    ε---NADPH 摩尔消光系数，6.22×103 L/mol；
    V---加入提取液体积，1 mL；
    V1---加入样本体积，0.04mL；
    V2---反应总体积，800μL =8×10-4L；
    T---反应时间，3min；
    W---样本质量；
    d---光径，1cm；
    500---细菌或细胞总数，500 万；
    Cpr---样本蛋白质浓度，mg/mL；建议使用本公司的 BCA 蛋白含量检测试剂盒。

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