- ￥720
- wksubio
- WS8080F
- 国内
- 2025年08月27日
12 年金牌会员
企业认证
相关产品推荐更多 >
万千商家帮你免费找货
0 人在求购买到急需产品
- 详细信息
- 技术资料
- 库存：
大量
- 英文名：
Phosphate Fructose Kinase (PFK)/Fructose-6-Phosphate Kinase Kit
- CAS号：
WS8080F
- 保质期：
3个月
- 供应商：
上海瓦兰生物
- 保存条件：
4℃
- 规格：
48T
本试剂盒仅供科研使用
果糖-6-磷酸激酶（6-phosphofructokinase，PFK）试剂盒说明书
(货号：WS8080F 分光法 48 样)
一、产品简介：
果糖-6-磷酸激酶（PFK，EC 2.7.1.11）广泛存在于动物、植物、微生物和培养细胞中，
是糖酵解过程的关键酶之一。
PFK 催化果糖-6-磷酸和 ATP 生成果糖-1,6-二磷酸和 ADP，丙*酸激酶和乳酸脱氢酶进
一步依次催化 NADH 氧化生成 NAD+，在 340nm 下测定 NADH 下降速率，即可反映 PFK
活性大小。
二、试剂盒的组成和配制：
试剂名称
规格
保存要求
备注
提取液
液体 60mL×1 瓶
4℃保存
试剂一
液体 18mL×1 瓶
4℃保存
试剂二
粉剂 mg×1 瓶
4℃保存
用前甩几下使试剂落入底部，再
加 8.2mL 的蒸馏水溶解
试剂三
粉剂 mg×4 支
-20℃保存
用前甩几下使试剂落入底部，每
支加 1.1mL 的蒸馏水溶解,用不
完的试剂分装后-20℃保存，禁
止反复冻融，三天内用完。
试剂四
粉剂 mg×1 支
-20℃保存
用前甩几下使试剂落入底部，再
加 4.2mL 的蒸馏水溶解备用。
试剂五
液体μL×1 支
-20℃保存
用前甩几下使试剂落入底部，再
加 4.2mL 的蒸馏水溶解备用。
三、所需的仪器和用品：
紫外分光光度计、1mL 石英比色皿（光径 1cm）、水浴锅、台式离心机、可调式移液
器、研钵、冰和蒸馏水。
四、果糖-6-磷酸激酶（PFK）酶活测定：
建议正式实验前选取 2 个样本做预测定，了解本批样品情况，熟悉实验流程，避免实验
样本和试剂浪费！
1、样本制备：
① 组织样本：
称取约 0.1g 组织，加入 1mL 提取液，进行冰浴匀浆。12000rpm，4℃离心 10min，取
上清，置冰上待测。
【注】：若增加样本量，可按照组织质量（
g）：提取液体积(mL)为 1：5~10 的比例进行提取。
② 细菌/细胞样本：
先收集细菌或细胞到离心管内，离心后弃上清；取 500 万细菌或细胞加入 1mL 提取液；
冰浴超声波破碎细菌或细胞（冰浴，功率 20％或 200W，超声 3s，间隔 10s，重复 30 次）；
12000rpm，4℃离心 10min，取上清，置冰上待测。
【注】：若增加样本量，可按照细菌/细胞数量（104个）：提取液（mL）为 1:1000~5000 比例进行提取。
③ 血清样本：直接检测。
2、上机检测：
① 紫外分光光度计预热 30min 以上，调节波长至 340nm，蒸馏水调零。
② 所有试剂解冻至室温（25℃），依次在 1mL 石英比色皿（光径 1cm）中加入：
试剂名称（
μL）
测定管本试剂盒仅供科研使用
2
试剂一
320
试剂二
160
试剂三
80
试剂四
80
试剂五
80
混匀，37℃下，孵育 5min 后。
样本
80
混匀，10s 时于 340nm 处读取吸光值 A1，
5min 后读取吸光值 A2，△A=A1-A2。
【注】1.若△A 的值在零附近，可以适当延长反应时间到 20min 或更长读取 A2，改变后的反应
时间需代入计算公式重新计算。或适当加大样本量，则改变后的加样体积需代入计
算公式重新计算。
2. 若 A1 太大如超过 2（如颜色较深的植物叶片，一般色素较高，则起始值会偏高）可
减少样本加样体积 V1（如减至 40μL，则补充 40μL 蒸馏水或试剂一），则改变后
V1需代入公式重新计算。或向待测样本中加少许活性炭混匀静置5min后12000rpm,
4℃离心 10min，上清液用于检测。
3. 若 A1 值低于 0.6 或△A 大于 0.6，可减少样本加样体积 V1（如减至 40μL，则补充
40μL 蒸馏水或试剂一）或减少反应时间 T（如 2min），则改变后的 V1 和 T 代入计
算公式重新计算。
4. 若下降趋势不稳定，可以每隔 10S 读取一次吸光值，选取一段线性下降的时间段来
参与计算，相对应的 A 值也代入计算公式重新计算。
五、结果计算：
1、按样本蛋白浓度计算：
酶活定义：每毫克组织蛋白每分钟催化 1nmol 果糖-6-磷酸和 1nmolATP 转化为 1nmol
果糖-1,6-二磷酸和 1nmol ADP 定义为一个酶活力单位。
PFK(nmol/min/mg prot)=[ ΔA÷(ε×d)×V2×109]÷(Cpr×V1÷V) ÷T =321.6×ΔA÷Cpr
2、按样本鲜重计算：
酶活定义：每克组织每分钟催化 1nmol 果糖-6-磷酸和 1nmolATP 转化为 1nmol 果糖-1,6-
二磷酸和 1nmol ADP 定义为一个酶活力单位。
PFK(nmol/min /g 鲜重)=[ ΔA÷(ε×d)×V2×109]÷(Cpr×V1÷V) ÷T =321.6×ΔA÷W
3、按细菌/细胞密度计算：
酶活定义：每1万个细菌或细胞每分钟催化1nmol果糖-6-磷酸和1nmolATP转化为1nmol
果糖-1,6-二磷酸和 1nmol ADP 定义为一个酶活力单位。
PFK(nmol/min /104 cell)=[ΔA÷(ε×d)×V2×109]÷(500×V1÷V)÷T=0.643×ΔA
4、血清 PFK 活力计算：
酶活定义：每毫升血清每分钟催化 1nmol 果糖-6-磷酸和 1nmolATP 转化为 1nmol 果糖
-1,6-二磷酸和 1nmol ADP 定义为一个酶活力单位。
PFK(nmol/min/mL)=[ΔA÷(ε×d)×V2×109]÷V1÷T=321.6×ΔA
ε---NADH 摩尔消光系数，6.22×103 L / mol /cm； d---光径，1cm；
V---加入提取液体积，1 mL；
V1---加入样本体积，0.08 mL；
V2---反应体系总体积，8×10-4 L；
T---反应时间，5min；
500---细菌或细胞总数，500 万；
W---样本质量，g；
Cpr---样本蛋白质浓度，mg/mL；建议使用本公司的 BCA 蛋白含量检测试剂盒。
风险提示：丁香通仅作为第三方平台，为商家信息发布提供平台空间。用户咨询产品时请注意保护个人信息及财产安全，合理判断，谨慎选购商品，商家和用户对交易行为负责。对于医疗器械类产品，请先查证核实企业经营资质和医疗器械产品注册证情况。
磷酸果糖激酶(PFK)/果糖-6-磷酸激酶试剂盒
￥720
