异柠檬酸裂解酶(ICL)试剂盒,微板法产品图

异柠檬酸裂解酶(ICL)试剂盒,微板法

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  • ￥1570
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  • WS7680W
  • 国内
  • 2026年06月25日
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    • 文献和实验
    • 技术资料
    • 库存：

      大量

    • 英文名：

      Isocitrate Lyase (ICL) Kit

    • CAS号：

      WS7680W

    • 保质期：

      3个月

    • 供应商：

      上海瓦兰生物

    • 保存条件：

      4℃

    • 规格：

      96T

    本试剂盒仅供科研使用
    异柠檬酸裂解酶（isocitrate lyase，ICL）试剂盒说明书
    （货号：WS7680W 微板法 96 样）
    一、产品简介：
    异柠檬酸裂解酶（ICL，EC4.1.3.1）是乙醛酸循环的关键酶之一，主要存在于植物和微
    生物中；在油料作物种子在萌发过程中，通过脂肪酸的β-氧化和乙醛酸循环将脂肪酸转变
    成碳水化合物。因此测定 ICL 活性对了解油类种子的代谢途径和物质转化，以及种子活
    力情况有重要意义。
    异柠檬酸裂解酶（ICL）催化分解异柠檬酸形成一分子琥珀酸和一分子乙醛酸。乙醛酸
    和二硝基*肼形成乙醛酸*肼，且在碱性条件下显褐色，其颜色深浅与乙醛酸含量呈正比。
    因此可以用比色法测定乙醛酸含量，进而计算得出 ICL 活性。
    该酶催化反应：isocitrate = succinate + glyoxylate。
    二、试剂盒的组成和配制：
    试剂名称
    规格
    保存要求
    备注
    提取液
    液体 100mL×1 瓶
    4℃保存
    试剂一
    液体 20mL×1 瓶
    4℃保存
    试剂二
    粉剂 mg×1 瓶
    4℃保存
    临用前甩几下使粉剂落入底部，
    再加 5mL 试剂一溶解备用；
    试剂三
    液体 4mL×1 瓶
    4℃保存
    试剂四
    液体 30mL×1 瓶
    4℃保存
    标准品
    粉剂 mg×1 支
    4℃保存
    若重新做标曲，则用到该试剂
    三、所需的仪器和用品：
    酶标仪、96 孔板、低温台式离心机、可调式移液器、研钵、冰和蒸馏水。
    四、异柠檬酸裂解酶（ICL）活性测定：
    建议正式实验前选取 2 个样本做预测定，了解本批样品情况，熟悉实验流程，避免实验
    样本和试剂浪费！
    1、样本制备：
    ① 组织样本：
    称取约 0.1g 组织（水分含量高的样本可取约 0.5g），加入 1mL 提取液，进行冰浴匀浆，
    12000rpm，4℃离心 15min，取上清置冰上待测。
    【注】：若增加样本量，可按照组织质量（
    g）：提取液体积(mL)为 5~10：1 的比例进行提取
    ② 细菌/细胞样本：
    先收集细菌或细胞到离心管内，离心后弃上清；取约 500 万细菌或细胞加入 1mL
    提取液，超声波破碎细菌或细胞（冰浴，功率 200W，超声 3s，间隔 10s，重复 30 次）；
    12000rpm 4℃离心 10min，取上清，置冰上待测。
    【注】：若增加样本量，可按照细菌/细胞数量（104）：提取液（mL）为 500~1000：1 的比例进行提取。
    2、上机检测：
    ① 酶标仪预热 30min 以上，调节波长至 445nm。
    ② 所有试剂解冻至室温。
    ③ 在 96 孔板中依次加入：
    试剂名称（
    μL）
    测定管
    对照管
    样本
    10
    试剂一
    50
    50本试剂盒仅供科研使用
    2
    试剂二
    20
    20
    混匀，于 30℃孵育 30min
    试剂三
    20
    20
    样本
    10
    混匀，于 30℃孵育 10min
    试剂四
    150
    150
    混匀，25℃孵育 5min，立即于 445nm 处读取吸光值 A（15min
    内完成检测），△A=A 测定-A 对照（每个样本做一个自身对照）。
    【注】1.若 A 测定超过 1.8，可降低样本量 V1（如 5μL，另外 5μL 用蒸馏水补齐，总体积 10μL
    保持不变）。则改变后的加样体积 V1 需代入计算公式重新计算。
    2.若△A 的值在零附近徘徊，则可增加样本量 V1（如 30μL，则试剂一相应减少），或增
    加样本取样质量（W），则改变后的加样体积 V1 和取样质量 W 需代入计算公式重新计算。
    五、结果计算：
    1、标准曲线方程：y = 0.0599x - 0.0017，x 是标准品摩尔质量（nmol），y 是△A。
    2、按样本蛋白浓度计算：
    酶活定义：每毫克组织蛋白每小时裂解 1nmol 异柠檬酸生成 1nmol 乙醛酸为一个酶活单位。
    ICL(nmol/h/mg prot)=[(ΔA+0.0017)÷0.0599]÷(V1×Cpr)÷T=3338.9×(ΔA+0.0017)÷Cpr
    3、按样本鲜重计算：
    酶活定义：每克组织每小时裂解 1nmol 异柠檬酸生成 1nmol 乙醛酸为一个酶活力单位。
    ICL(nmol/h/g 鲜重)=[(ΔA+0.0022)÷0.0599]÷(W ×V1÷V)÷T=3338.9×(ΔA+0.0017)÷W
    4、按细菌/细胞密度计算：
    酶活定义：每 1 万个细菌/细胞每小时裂解 1nmol 异柠檬酸生成 1nmol 乙醛酸为一酶活单位。
    ICL(nmol/h/104 cell)=[(ΔA+0.0022)÷0.0599]÷(500×V1÷V)÷T=6.68×(ΔA+0.0017)
    V---加入提取液体积，1 mL； V1---加入样本体积，0.01mL； 标准品 Mr---92.05；
    T---反应时间，30min=0.5h； W---样本质量，g；
    500---细胞数量；
    Cpr---样本蛋白质浓度，mg/mL，建议使用本公司的 BCA 蛋白含量检测试剂盒。
    附：标准曲线制作过程：
    1 制备标准品母液（1mg/mL）：临用前加 1mL 蒸馏水溶解，（母液需在两天内用且-20℃
    保存）。
    2 把母液稀释成以下浓度：0, 0.02, 0.04, 0.06, 0.08, 0.1mg/mL。也可根据实际来调整浓
    度。
    3 依据测定管的加样表操作，根据结果即可制作标准曲线。

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