本试剂盒仅供科研使用
植物果糖1,6-二磷酸醛缩酶（Fructose-1,6-bisphosphate aldolase, FBA）
试剂盒说明书
（货号：WS3060W 微板法 96 样）
一、产品简介：
植物中的果糖 1,6- 二磷酸醛缩酶(Fructose-1,6-Bisphosphate Aldolase, FBA) 是卡尔文
循环(Calvin)中重要的酶，是控制光合作用速率的重要酶之一。在植物中有两种在结构上
有一定同源性的果糖 1, 6-二磷酸醛缩酶的异构型,即叶绿体型和胞质型。
FBA 可催化果糖 1,6-二磷酸生成 3-磷酸甘油醛和磷酸二羟*酮，在酶促复合物的相继
作用下催化 NADH 和磷酸二羟*酮生成 NAD 和α-磷酸甘油，检测 340nm 处 NADH 的下
降速率即可得出 FBA 活性的高低。
二、试剂盒的组成和配制：
试剂名称
规格
保存要求
备注
提取液一
液体 100mL×1 瓶
4℃保存
提取液二
液体 100mL×1 瓶
4℃保存
试剂一
液体μL×1 支
-20℃保存
用前甩几下或离心使试剂落入底
部，再加 1.1mL 蒸馏水溶解备用。
试剂二
粉剂 mg×4 支
-20℃保存
用前甩几下或离心使试剂落入底
部，每支加 0.3mL 蒸馏水溶解，用
不完的试剂分装后-20℃保存，禁止
反复冻融，三天内用完。
试剂三
液体μL×1 支
-20℃保存
用前甩几下或离心使试剂落入底
部，再加 1.1mL 蒸馏水溶解备用。
试剂四
液体 15mL×1 瓶
4℃保存
试剂五
粉剂 mg×1 支
4℃保存
用前甩几下或离心使试剂落入底
部，再加 2.1mL 蒸馏水溶解备用。
三、所需的仪器和用品：
酶标仪、96 孔板、可调式移液器、天平、震荡仪、低温离心机、研钵。
四、植物果糖 1,6-二磷酸醛缩酶（FBA）活性测定：
1、样本制备：
① 总FBA酶提取：建议称取约0.1g样本，加入1mL提取液二进行冰浴匀浆，于4℃，
13000rpm离心5min，取上清液测定。
② 胞浆和叶绿体 FBA 酶的分离：
称取约0.2g样本，加入1mL提取液一，快速冰浴匀浆后于4℃，1600rpm离心5min，弃沉
淀，取上清再4℃，5000rpm离心15min，取上清用于测定胞浆FBA酶活性，取沉淀加1mL
提取液二，强力涡旋震荡15s，置于冰上(或冰箱)孵育15min，在4℃，13000rpm离心5min，
取上清测定叶绿体中FBA酶活性。提示：整个叶绿体的提取过程须保持4℃低温环境。
建议测定总FBA酶活性，按照步骤①提取粗酶液，若需要分别测定胞浆和叶绿体中的
FBA，则按照步骤②提取粗酶液。
【注】：若增加样本量，可按照组织质量（
g）：提取液体积(mL)为 1：5~10 的比例进行提取
2、上机检测：
① 酶标仪预热 30min，调节波长至 340nm，设定温度 25℃。
② 所有试剂解冻至室温（25℃）。本试剂盒仅供科研使用
2
③ 在 96 孔板中依次加入：
试剂名称（
μL）
测定管
样本
20
试剂一
10
试剂二
10
试剂三
10
试剂四
130
试剂五
20
轻轻混匀，室温（25℃）条件下，于 340nm 处测
定，2min 时读取 A1，15min 后读取 A2，
ΔA=A1-A2。
【注】1. 若△A 值在零附近，可适当延长反应时间 T（如由 15min 增至 25min 后读取 A2），或增
加样本加样体积 V1（如由 20μL 增至 60μL，则试剂四相应减少），则改变后的 T 和 V1
需代入公式重新计算。
2. 若下降趋势不稳定，可以每隔 20S 读取一次吸光值，选取一段线性下降的时间段来参与
计算，相对应的 A 值也代入计算公式重新计算。
3. 若起始值 A1 太大如超过 2（如颜色较深的植物叶片，一般色素较高，则起始值相对会
偏高），可以适当减少样本加样量，则改变后的加样体积需代入计算公式重新计算。
或向待测样本中加少许活性炭混匀静置 5min 后 12000rpm, 4℃离心 10min，上清液用于
检测；
4. 若ΔA 值大于 0.5，需减少反应时间 T（如由 15min 减至 5min 后读取 A2），或减少样本
加样体积 V1（如由 20μL 减至 5μL，则试剂四相应增加），则改变后的 T 和 V1 需代入
公式重新计算。
五、结果计算：
1、按照样本蛋白浓度计算：
酶活定义：每毫克组织蛋白每分钟消耗 1 nmol 的 NADH 定义为一个酶活力单位。
FBA(nmol/min/mg prot)=[ ΔA÷(ε×d)×V2×109]÷(V1×Cpr)÷T=214.4×ΔA÷Cpr
2、按照样本质量计算：
酶活定义：每克组织每分消耗 1 nmol 的 NADH 定义为一个酶活力单位。
FBA(nmol/min/g 鲜重)=[ ΔA÷(ε×d)×V2×109]÷(W×V1÷V)÷T=214.4×ΔA÷W
ε---NADH 摩尔消光系数，6.22×103 L / mol /cm；
d---比色皿光径，0.5cm；
V---加入提取液体积，1mL；
V1---加入样本体积，0.02mL；
V2---反应体系总体积，0.2mL=2×10-4L；
T---反应时间，15 min；
W---样本质量，g
Cpr---样本蛋白质浓度，mg/mL；建议使用本公司的 BCA 蛋白含量检测试剂盒。
文献和实验
