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线粒体-3-磷酸甘油脱氢酶（mt-GPD）活性试剂盒,微板法

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  • ￥1630
  • wksubio
  • WS7190W
  • 国内
  • 2025年12月10日
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    • 英文名：

      Mitochondrial 3-phosphate glycerol dehydrogenase (mt-GPD) activity kit

    • CAS号：

      WS7190W

    • 保质期：

      3个月

    • 供应商：

      上海瓦兰生物

    • 保存条件：

      4℃

    • 规格：

      96T

    本试剂盒仅供科研使用
    线粒体-3-磷酸甘油脱氢酶（mt-GPD）活性测定试剂盒说明书
    （货号：WS7190W 微板法 96 样）
    一、产品简介：
    线粒体-3-磷酸甘油脱氢酶（mt-GPD）存在于线粒体中，在 3-磷酸甘油途径中起重要
    作用，催化底物 3-磷酸甘油生成磷酸二羟*酮，同时生成的电子和氢进入呼吸链参与氧
    化磷酸化；在电子传递体（PMS）存在下，使噻唑蓝（MTT）还原生成蓝色产物，通过
    检测该蓝色产物在 550nm 处的增加速率，即可得出 mt-GPD 活性大小。
    二、试剂盒组成和配制：
    试剂名称
    规格
    保存要求
    备注
    试剂一
    液体 100mL×1 瓶
    4℃保存
    试剂二
    液体 20mL×1 瓶
    4℃保存
    试剂三
    液体 0.2mL×1 支
    4℃保存
    试剂四
    粉剂 mg×2 支
    4℃保存
    用前甩几下使试剂落入底部，
    每支加 0.6mL 的蒸馏水溶解。
    一周内用完。
    试剂五
    粉剂 mg×4 支
    -20℃保存
    用前甩几下使试剂落入底部，
    每支加 0.3mL 的蒸馏水溶解。
    一天内用完。
    试剂六
    液体 17mL×1 瓶
    4℃保存
    试剂七
    粉剂 mg×1 支
    4℃保存
    用前甩几下使试剂落入底部，
    临用前加 1.1mL 蒸馏水溶解。
    三、所需的仪器和用品：
    酶标仪、96 孔板、可调试移液器、台式离心机、水浴锅、研钵、冰和蒸馏水。
    四、线粒体-3-磷酸甘油脱氢酶（mtGPD）活性测定：
    建议正式实验前选取 2 个样本做预测定，了解本批样品情况，熟悉实验流程，避免实验
    样本和试剂浪费！
    1、线粒体制备（提示：整个线粒体的提取过程须保持 4℃低温环境）：
    ① 称取约 0.1g 组织或收集 500 万细菌/细胞，加入 1mL 试剂一，用冰浴匀浆器或研钵匀
    浆，转移至离心管后于 4℃×700g 离心 10min。
    ② 弃沉淀，上清液移至另一离心管中，4℃×12000g 离心 10min。用移液器移除上清液(上
    清液即胞浆提取物，可用于测定从线粒体泄漏的酶活性（此步可选做）)，留下沉淀
    （沉淀即为线粒体）。
    ③ 在沉淀（线粒体）中加入200μL试剂二和2μL试剂三，超声波破碎（冰浴，功率20％或
    200W，超声3s，间隔10秒，重复30次），液体置于冰上用于线粒体-3-磷酸甘油脱氢酶
    （mtGPD）活性测定。
    【注】：若增加样本量，可按照组织质量（g）：提取液体积(mL)为 1：5~10 的比例进行提取，或按照
    细菌/细胞数量（104）：提取液（mL）为 500~1000：1 的比例进行提取。
    2、上机检测：
    ① 酶标仪预热 30min 以上，调节波长至 550nm。
    ② 在 96 孔板中依次加入下列试剂：本试剂盒仅供科研使用
    2
    试剂名称（μL）
    测定管
    样本
    20
    试剂四
    10
    试剂五
    10
    试剂六
    150
    试剂七
    10
    混匀后立即在 550nm 处读取 A1 值，5min 后读取 A2。
    ΔA=A2-A1。
    【注】：加完试剂四即启动反应，所以试剂四加完需立即检测，若ΔA 小于 0.05，
    则增加样本上样量 V1，试剂三相应减少保持原体系不变（如样本上样量为
    40μL 时，试剂三为 130μL）。则改变后的 V1 需带入计算公式重新计算。
    五、结果计算：
    1、 按样本蛋白浓度计算
    酶活定义：每毫克组织蛋白每分钟还原 1 nmol 噻唑蓝（MTT）定义为一个酶活性单位。
    mtGPD 活性（nmol/min/mg prot）＝[ΔA×V2÷（ε×d）×109]÷(V1×Cpr) ÷T=493.8×ΔA÷Cpr
    2、 按样本鲜重计算
    酶活定义：每克组织每分钟还原 1 nmol 噻唑蓝（MTT）定义为一个酶活性单位。
    mtGPD 活性（nmol/min/g 鲜重）＝[ΔA×V2÷（ε×d）×109]÷(W×V1÷V)÷T=99.8×ΔA÷W
    3、 按细菌或细胞密度计算
    酶活定义：每 1 万个细菌或细胞每分钟还原 1 nmol 噻唑蓝（MTT）定义为一个酶活单位。
    mtGPD 活性（nmol/min /104 cell）＝[ΔA×V2÷（ε×d）×109]÷(500×V1÷V)÷T=0.2×ΔA
    ε---还原型 MTT 的摩尔消光系数，8.1×103 L/mol/cm；
    d---96 孔板光径，0.5cm；
    V---加入提取液体积，0.202mL；
    V1---加入样本体积，0.02 mL；
    V2---反应体系总体积，2×10-4 L；
    T---反应时间，5min；
    W---样本质量，g；
    500---细菌或细胞总数，500 万；
    Cpr---样本蛋白质浓度，mg/mL；建议使用本公司的 BCA 蛋白含量检测试剂盒。

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