本试剂盒仅供科研使用
ATP 含量测定试剂盒说明书
（货号：WS7580F 分光法 48 样）
一、产品简介：
三磷酸腺苷（ATP）是生物体内能量转换最基本的载体,是生物体内最直接的能量来源，
测定 ATP 含量并且计算能荷，能够反映能量代谢状态。
三磷酸腺苷（ATP）在己糖激酶和 6-磷酸葡萄糖脱氢酶混合酶的作用下，使 ATP 水解
并伴随着 NADPH 的生成，通过检测 340nm 下 NADPH 的增加量，进而计算得到 ATP 的
含量。
二、试剂盒的组成和配制：
试剂名称
规格
保存要求
备注
提取液
60mL×1 瓶
4℃保存
试剂一
粉剂×1 支
4℃保存
临用前甩几下或离心，使粉剂落
入底部，再加 1.1mL 蒸馏水备用。
试剂二
粉剂×1 支
-20℃保存
临用前甩几下或离心，使粉剂落
入底部，再加 1.1mL 蒸馏水备用。
试剂三
33mL 液体×1 瓶
4℃保存
试剂四
粉剂×1 支
4℃保存
临用前甩几下或离心，使粉剂落
入底部，再加 1.1mL 蒸馏水备用。
三、所需的仪器和用品：
紫外分光光度计、1mL 石英比色皿（光径 1cm）、恒温培养箱、可调式移液枪、研钵
和蒸馏水。
四、ATP 含量检测：
建议正式实验前选取 2 个样本做预测定，了解本批样品情况，熟悉实验流程，避免实验
样本和试剂浪费！
1、样本制备：
① 组织样本：
称取约 0.1g 组织加入研钵中，加入 1mL 提取液，进行冰浴匀浆，12000rpm，4℃离心
10min，取上清液，置冰上待测。
【注】：也可以按照组织质量（
g）：提取液体积(mL)为 1：5~10 的比例提取
② 细菌/真菌样本：
先收集细菌或细胞到离心管内，离心弃上清；取 500 万细菌或细胞加入 1mL 提取液；
冰浴超声波破碎细菌或细胞（冰浴，功率 20％或 200W，超声 3S，间隔 10S，重复 30
次）；12000rpm，4℃离心 10min，取上清液，置冰上待测。
【注】：也可按照细菌或细胞数量（104 个）：提取液体积（mL）为 500~1000：1 的比例进行提取
③ 液体样本：澄清的液体直接检测；若浑浊则离心后取上清检测。
④ 高蛋白含量样本：
④-1：称取约 0.1g 组织加入研钵中，加入 1mL 蒸馏水，进行匀浆，转至 EP 管中，于
95℃水浴中煮 5min，取出冷却至室温后于 12000rpm，室温离心 10min，上清液待测。
④-2：或称取约 0.1g 组织加入研钵中，加入 0.5mL 高氯酸（0.5M），进行冰浴匀浆，
8000rpm，4℃离心 10min，取全部上清至另一 EP 管中，再加入与上步所取上清液等体
积的 KOH 或 NaOH（0.5M）混匀，使整个液体 PH 近中性，若澄清直接检测，若浑浊
则 8000rpm，4℃离心 5min 后取上清液测定，此时整个上清液体积记为 V3。本试剂盒仅供科研使用
2
2、上机检测：
① 紫外分光光度计预热 30 min 以上，调节波长到 340nm，蒸馏水调零。
② 在 1mL 石英比色皿（光径 1cm）中依次加入：
试剂名称（
μL）
测定管
样本
40
试剂一
20
试剂二
20
试剂三
600
混匀，室温（25℃）下，5min后于340nm
处读取A1值。
试剂四
20
混匀，室温（25℃）下，反应15min于
340nm处读取A2值，ΔA=A2-A1。
【注】若ΔA 差值在零附近，可增加样本量 V1（如 100μL，则试剂三相应减少）。
则改变后的 V1 需代入公式重新计算。
五、结果计算：
1、按样本鲜重计算：
ATP 含量(μmol/g 鲜重)=[ΔA÷(ε×d)×V2×106]÷(W×V1÷V)=2.78×ΔA÷W
2、按细菌/细胞密度计算：
ATP 含量(μmol/104 cell)=[ΔA÷(ε×d)×V2×106]÷(500×V1÷V)=0.006×ΔA
3、液体中 ATP 含量计算：
ATP 含量(μmol/mL)=[ΔA÷(ε×d)×V2×106]÷V1=2.78×ΔA
4、高蛋白样本中 ATP 含量计算：
ATP 含量(μmol/g 鲜重)=[ΔA÷(ε×d)×V2×106]÷(W×V1÷V)=2.78×ΔA÷W
ATP 含量(μmol/g 鲜重)=[ΔA÷(ε×d)×V2×106]÷(W×V1÷V3)=2.78×ΔA÷V3÷W
ε---NADPH的摩尔吸光系数为6.3×103L/mol/cm； d---光径距离，1cm；
V---提取液体积，1mL；
V1---样本体积，40μL=0.04mL；
V2---反应总体积，700μL=7×10-4L；
ATP分子量---551.14；
W---样本质量，g。
文献和实验
技术资料