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焦磷酸:果糖-6-磷酸-1-磷酸转移酶(PFP)试剂盒

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  • ¥1300
  • wksubio
  • WS7060F
  • 国内
  • 2025年11月07日
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    • 英文名

      Pyrophosphate: Fructose-6-phosphate 1-phosphate transferase (PFP) Kit

    • CAS号

      WS7060F

    • 保质期

      3个月

    • 供应商

      上海瓦兰生物

    • 保存条件

      4℃

    • 规格

      48T

    本试剂盒仅供科研使用
    焦磷酸:果糖-6-磷酸-1-磷酸转移酶(Pyrophosphate: fructose-6 –
    phosphate-1-phosphoric acid transferasePFP)试剂盒说明书
    (货号:WS7060F 分光法 48 样)
    一、产品简介:
    焦磷酸:果糖-6-磷酸-1-磷酸转移酶(PFPEC2.7.1.90)是一种胞质酶,广泛存在于
    植物组织中,催化果糖-6-磷酸与果糖-1,6-二磷酸之间的可逆转化,在光合作用碳代谢
    中起重要作用。
    PFP 催化 6-磷酸果糖转化为 1,6-二磷酸果糖,接着在醛缩酶和磷酸丙糖异构酶的作
    用下转变为磷酸二羟*酮,再由 3-磷酸甘油脱氢酶催化,并使 NADH 340nm 处的吸
    光度下降,由此反映 PFP 酶活性高低。
    二、试剂盒的组成和配制:
    试剂名称
    规格
    保存要求
    备注
    提取液
    液体 100mL×1
    4℃保存
    试剂一
    粉剂 mg×2
    -20℃保存
    用前甩几下使试剂落入底部,
    每支再加 3.1mL 的蒸馏水,用
    不完的试剂分装后-20℃保存,
    禁止反复冻融,三天内用完。
    试剂二
    液体μL×1
    -20℃保存 用前甩几下使试剂落入底部,
    再加 6.1mL 的蒸馏水溶解
    试剂三
    液体 3mL×1
    4℃保存
    三、所需的仪器和用品:
    紫外分光光度计、1mL 石英比色皿(光径 1cm)、低温离心机、可调式移液器、移液
    枪、研钵、冰和蒸馏水。
    四、焦磷酸:果糖-6-磷酸-1-磷酸转移酶(PFP)酶活测定:
    建议正式实验前选取 2 个样本做预测定,了解本批样品情况,熟悉实验流程,避免实
    验样本和试剂浪费!
    1、样本制备
    称取约 0.1g 组织,加入 1mL 提取液,进行冰浴匀浆。12000rpm4℃离心 20min
    取上清置冰上待测。
    【注】:若增加样本量,可按照组织质量(
    g):提取液体积(mL)15~10 的比例进行提取
    2、上机检测
    ① 紫外分光光度计预热 30 min 以上,调节波长到 340nm,蒸馏水调零。
    ② 所有试剂解冻至室温(25℃)。
    ③ 依次在 1mL 石英比色皿中加入:
    试剂名称(μL
    测定管
    样本
    60
    提取液
    340
    试剂一
    120
    试剂二
    120
    试剂三
    60
    混匀,室温(25℃)条件下,10s 时于
    340nm 处读取吸光值 A120min 后读取
    吸光值 A2,△A=A1-A2本试剂盒仅供科研使用
    2
    【注】1.若A 的值在零附近,可以适当延长反应时间到 30min 或更长读取 A2,改变后的反
    应时间需代入计算公式重新计算。或适当加大样本量,则改变后的加样体积 V1 需代
    入计算公式重新计算。
    2. 若起始值 A 太大如超过 2(如颜色较深的植物叶片,一般色素较高,则起始值相对
    会偏高),可以适当减少样本加样量,则改变后的加样体积需代入计算公式重新计算。
    或向待测样本中加少许活性炭混匀静置 5min 12000rpm, 4℃离心 10min,上清液
    用于检测;
    3. ΔA 的值大于 0.5,则需减少反应时间(如减少至 5min),则改变后的反应时间 T
    需代入计算公式重新计算。
    4. 若下降趋势不稳定,可以每隔 10S 读取一次吸光值,选取一段线性下降的时间段来
    参与计算,相对应的 A 值也代入计算公式重新计算。
    五、结果计算:
    1、按照样本蛋白浓度计算
    酶活定义:每毫克组织蛋白每分钟消耗 1 nmol NADH 定义为一个酶活力单位。
    PFPnmol/min/mg prot)=[ ΔA÷ε×d×V2×109]÷(Cpr×V1÷V) ÷T=93.78×ΔA÷Cpr
    2、按照样本质量计算
    酶活定义:每克组织每分钟消耗 1 nmol NADH 定义为一个酶活力单位。
    PFPnmol/min/g 鲜重)=[ ΔA÷ε×d×V2×109]÷(W ×V1÷V) ÷T=93.78×ΔA÷W
    ε---NADH 摩尔消光系数,6.22×103 L / mol /cm
    d---比色皿光径,1cm
    V---加入提取液体积,1mL
    V1---加入样本体积,0.06mL
    V2---反应体系总体积,0.7mL=7×10-4L
    T---反应时间,20 min
    W---样本质量,g
    Cpr---样本蛋白质浓度,mg/mL;建议使用本公司的 BCA 蛋白含量检测试剂盒。

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