线粒体异柠檬酸脱氢酶(NAD-IDH)试剂盒,微板法产品图

线粒体异柠檬酸脱氢酶(NAD-IDH)试剂盒,微板法

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  • ￥580
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  • WS3380W
  • 国内
  • 2026年08月05日
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    • 文献和实验
    • 技术资料
    • 库存：

      大量

    • 英文名：

      Mitochondrial Isocitrate Dehydrogenase (NAD-IDH) Kit

    • CAS号：

      WS3380W

    • 保质期：

      3个月

    • 供应商：

      上海瓦兰生物

    • 保存条件：

      4℃

    • 规格：

      96T

    本试剂盒仅供科研使用
    线粒体异柠檬酸脱氢酶(NAD-IDH)试剂盒说明书
    （货号：WS3380W 微板法 96 样）
    一、产品简介：
    线粒体异柠檬酸脱氢酶即 NAD-异柠檬酸脱氢酶（NAD-IDH EC 1.1.1.41）广泛存在
    于动物、植物和培养细胞的线粒体中，在三羧酸循中催化异柠檬酸生成α-酮戊二酸，同
    时将 NAD+ 还原为 NADH，是三羧酸循环的限速酶之一，其催化的反应是细胞 NADH
    主要来源之一。
    NAD-异柠檬酸脱氢酶催化 NAD+ 还原生成 NADH，导致 340nm 处光吸收上升，进而
    得出 NAD-IDH 酶活性的大小。
    二、试剂盒组成和配制：
    试剂名称
    规格
    保存要求
    备注
    试剂一
    液体 100mL×1 瓶
    -20℃保存
    试剂二
    液体 20mL×1 瓶
    -20℃保存
    试剂三
    液体μL×1 瓶
    -20℃保存
    试剂四
    液体 13mL×1 瓶
    4℃保存
    试剂五
    粉剂×1 支
    4℃保存
    临用前甩几下或离心使粉剂落入底
    部，再加 2.2mL 蒸馏水溶解备用。
    试剂六
    粉剂×1 支
    4℃保存
    临用前甩几下或离心使粉剂落入底
    部，再加 3.5mL 蒸馏水溶解备用。
    三、所需的仪器和用品：
    酶标仪、96 孔板、低温离心机、可调式移液器、、研钵、冰和蒸馏水。
    四、NAD-异柠檬酸脱氢酶(NAD-IDH)活性测定：
    建议正式实验前选取 2 个样本做预测定，了解本批样品情况，熟悉实验流程，避免实验
    样本和试剂浪费！
    1、线粒体制备（提示：整个线粒体的提取过程须保持 4℃低温环境）：
    ① 称取约 0.1g 组织或收集 500 万细菌/细胞，加入 1mL 试剂一，用冰浴匀浆器或研钵匀
    浆，转移至离心管后于 4℃×700g 离心 10min。
    ② 弃沉淀，上清液移至另一离心管中，4℃×12000g 离心 10min。用移液器移除上清液(上
    清液即胞浆提取物，可用于测定从线粒体泄漏的酶活性（此步可选做）)，留下沉淀
    （沉淀即为线粒体）。
    ③ 在沉淀（线粒体）中加入200μL试剂二和2μL试剂三，超声波破碎（冰浴，功率20％或
    200W，超声3s，间隔10秒，重复30次），液体置于冰上用于线粒体NAD-异柠檬酸脱氢
    酶活性测定。
    【注】：若增加样本量，可按照组织质量（
    g）：提取液体积(mL)为 1：5~10 的比例进行提取，或按照细
    菌/细胞数量（104）：提取液（mL）为 500~1000：1 的比例进行提取。
    2、上机检测：
    ① 酶标仪预热 30min 以上，设定温度 37℃，调节波长至 340nm。
    ② 所有试剂解冻至室温（25℃）。
    ③ 在 96 孔板中依次加入：本试剂盒仅供科研使用
    2
    试剂名称（
    μL）
    测定管
    样本
    20
    试剂四
    130
    试剂五
    20
    试剂六
    30
    混匀，37℃条件下，30s 时于 340nm 处读取 A1 值，30min
    后读取 A2 值，ΔA=A2-A1。
    【注】：若ΔA 在零附近，可以延长反应时间 T（如：60min 或更长），或增加样本量 V1（如 40μL，
    则试剂四相应减少）。调整后的反应时间 T 或样本体积 V1 需代入计算公式重新计算。
    五、结果计算：
    1、按样本蛋白浓度计算：
    酶活定义：每毫克组织蛋白每分钟生成 1 nmol NADH 定义为一个酶活力单位。
    NAD-IDH(nmol/min/mg prot)=[ΔA×V2÷(ε×d)×109]÷(V1×Cpr)÷T=107.2×ΔA÷Cpr
    2、按样本鲜重计算：
    酶活定义：每克组织每分钟生成 1 nmol NADH 定义为一个酶活力单位。
    NAD-IDH(nmol/min/g 鲜重)=[ΔA×V2÷(ε×d)×109]÷(W×V1÷V)÷T=21.7×ΔA÷W
    3、按细菌或细胞密度计算：
    酶活定义：每 1 万个细菌或细胞每分钟生成 1 nmol 的 NADH 定义为一个酶活力单位。
    NAD-IDH(nmol/min/104)=[ΔA×V2÷(ε×d)×109]÷(500×V1÷V)÷T=0.044×ΔA
    ε---NADH 摩尔消光系数，6.22×103 L / mol /cm；
    d---96 孔板光径，0.5cm；
    V---加入提取液体积，0.202 mL；
    V1---加入样本体积，0.02 mL；
    V2---反应体系总体积，2×10-4 L；
    W---样本质量，g。
    500---细菌或细胞总数，万；
    T---反应时间，30 min；
    Cpr---样本蛋白质浓度，mg/mL；建议使用本公司的 BCA 蛋白含量检测试剂盒。

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    线粒体异柠檬酸脱氢酶(NAD-IDH)试剂盒说明书微板法

    145 人阅读发布时间：2023-08-21 17:15

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