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α-酮戊二酸脱氢酶(α-KGDH)试剂盒

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  • ￥730
  • wksubio
  • WS0480F
  • 国内
  • 2026年04月07日
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    • 英文名：

      α- Ketoglutarate dehydrogenase（ α- KGDH reagent kit

    • CAS号：

      WS0480F

    • 保质期：

      3个月

    • 供应商：

      上海瓦兰生物

    • 保存条件：

      4℃

    • 规格：

      48T

    本试剂盒仅供科研使用
    α-酮戊二酸脱氢酶（α-KGDH）活性测定试剂盒说明书
    （货号：WS0480F 紫外分光法 48 样）
    一、产品简介：
    α-酮戊二酸脱氢酶（
    α-KGDH，EC 1.2.4.2）是三羧酸循环调控关键酶之一，广泛存在
    于动物、植物微生物和培养细胞中。可催化α-酮戊二酸、NAD+ 和辅酶 A 生成琥珀酰辅
    酶 A、 二氧化碳和 NADH，通过检测 NADH 在 340 nm 的上升速率即可得出α-KGDH
    酶活性大小。
    二、试剂盒的组成和配制：
    试剂名称
    规格
    保存要求
    备注
    提取液
    液体 60mL×1 瓶
    4℃保存
    试剂一
    液体 35mL×1 瓶
    4℃保存
    试剂二
    粉剂 mg×1 支
    4℃保存
    用前甩几下使试剂落入底部，
    再加 1.1mL 的蒸馏水溶解。
    试剂三
    粉剂 mg×1 支
    4℃保存
    用前甩几下使试剂落入底部，
    再加 1.1mL 的蒸馏水溶解。
    三、所需的仪器和用品：
    紫外分光光度计、1mL 石英比色皿（光径 1cm）、水浴锅、台式离心机、可调式移液
    器、研钵、冰和蒸馏水。
    四、α-酮戊二酸脱氢酶（
    α-KGDH）活性测定：
    建议正式实验前选取 2 个样本做预测定，了解本批样品情况，熟悉实验流程，避免实验
    样本和试剂浪费！
    ① 组织样本：
    称取约 0.1g 组织（水分充足的样本可取 0.5g），加入 1mL 提取液，进行冰浴匀浆。
    12000rpm，4℃离心 10min，取上清，置冰上待测。
    【注】：若增加样本量，可按照组织质量（
    g）：提取液体积(mL)为 1：5~10 的比例进行提取。
    ② 细菌/细胞样本：
    先收集细菌或细胞到离心管内，离心后弃上清；取 1000 万细菌或细胞加入 1mL 提取
    液；冰浴超声波破碎细菌或细胞（冰浴，功率 20％或 200W，超声 3s，间隔 10s，重复
    30 次）；12000rpm，4℃离心 10min，取上清，置冰上待测。
    【注】：若增加样本量，可按细菌/细胞数量（104个）：提取液（mL）为 1000~5000：1 比例进行提取。
    2、上机检测：
    ① 紫外分光光度计预热 30min 以上，调节波长至 340nm，蒸馏水调零。
    ② 所有试剂解冻至室温（25℃）。
    ③ 在 1mL 石英比色皿（光径 1cm）中依次加入：
    试剂名称（
    μL）
    测定管
    样本
    100
    试剂一
    600
    试剂二
    20
    试剂三
    20
    混匀，37℃条件下，30s 时于 340nm 处读取 A1
    值，15min 后读取 A2 值，ΔA=A2-A1。本试剂盒仅供科研使用
    2
    【注】若ΔA 在零附近徘徊，可以增加样本量 V1（如增至 140μL，则试剂一相应减少），或
    延长反应时间 T（如增至 30min 或更长），则改变后的 V1 和 T 需代入公式重新计算。
    五、结果计算：
    1、按样本蛋白浓度计算：
    酶活定义：每毫克组织蛋白每分钟生成 1 nmol 的 NADH 定义为一个酶活力单位。
    α-KGDH 活性(nmol/min/mg prot)=[ΔA×V2÷(ε×d)×109]÷(V1×Cpr)÷T=79.3×ΔA÷Cpr
    2、按样本鲜重计算：
    酶活定义：每克组织每分钟生成 1 nmol 的 NADH 定义为一个酶活力单位。
    α-KGDH 活性(nmol/min/g 鲜重)=[ΔA×V2÷(ε×d)×109]÷(W×V1÷V)÷T=79.3×ΔA÷W
    3、按细菌或细胞密度计算：
    酶活定义：每 1 万个细菌或细胞每分钟生成 1 nmol 的 NADH 定义为一个酶活力单位。
    α-KGDH 活性(nmol/min/104 cell)=[ΔA×V2÷(ε×d)×109]÷(1000×V1÷V)÷T=0.08×ΔA
    4、按照液体体积计算：
    酶活定义：每毫升液体每分钟生成 1 nmol 的 NADH 定义为一个酶活力单位。
    α-KGDH 活性(nmol/min/mL)=[ΔA×V2÷(ε×d)×109]÷V1÷T=79.3×ΔA
    ε---NADH 摩尔消光系数，6.22×103 L/mol/cm；
    d---比色皿光径，1cm；
    V2---反应体系总体积，7.4×10-4 L；
    V1---加入样本体积，0.1 mL；
    V---加入提取液体积，1mL；
    T---反应时间，15min；
    Cpr---样本蛋白质浓度，mg/mL；建议使用本公司的 BCA 蛋白含量检测试剂盒；
    W---样本质量，g；
    1000---细菌或细胞总数，1000 万。

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