Ca2+—ATP酶试剂盒,微板法产品图

Ca2+—ATP酶试剂盒,微板法

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  • ￥410
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  • WS0680W
  • 国内
  • 2026年07月23日
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    • 英文名：

      Ca2+- ATPase Kit

    • CAS号：

      WS0680W

    • 保质期：

      3个月

    • 供应商：

      上海瓦兰生物

    • 保存条件：

      4℃

    • 规格：

      48T

    本试剂盒仅供科研使用
    Ca2+ - ATP 酶活性测定说明书
    （货号：WS0680W 微板法 48 样）
    一、产品简介：
    Ca2+是细胞内重要的信号分子，细胞质基质始终维持在一个较低水平的 Ca2+浓度，Ca2+
    浓度的维持主要由 Ca2+-ATP 酶来维持，该酶可催化 ATP 水解生成 ADP 和无机磷。通过
    测定无机磷的量来确定该酶活性高低。
    二、所需的仪器和用品：
    酶标仪、96 孔板、水浴锅、台式离心机、可调式移液器、研钵、冰和蒸馏水。
    三、试剂盒的组成和配制：
    【注】：全程操作需无磷环境；试剂配置最好用新的枪头和玻璃移液器等，也可以用一次性塑料器皿，避
    免磷污染。
    四、Ca2+-ATP 酶活性检测：
    建议正式实验前选取 2 个样本做预测定，了解本批样品情况，熟悉实验流程，避免实验
    样本和试剂浪费！
    1、样本制备：
    ① 组织样本：
    称取约 0.1g 组织，加入 1mL 提取液，进行冰浴匀浆。 4℃×12000rpm 离心 10min，取
    上清，置冰上待测。
    【注】：若增加样本量，可按照组织质量(g)：提取液体积(mL)为 1：5~10 的比例进行提取。
    ② 细菌/细胞样本：
    先收集细菌或细胞到离心管内，离心后弃上清；取约 500 万细菌或细胞加入 1mL
    提取液，超声波破碎细菌或细胞（冰浴，功率 200W，超声 3s，间隔 10s，重复 30 次）；
    12000rpm 4℃离心 10min，取上清，置冰上待测。
    【注】：若增加样本量，可按照细菌/细胞数量(104)：提取液(mL)为 500~1000：1 的比例进行提取。
    ③ 液体样本：直接检测；若浑浊，离心后取上清检测。
    2、上机检测：
    ① 酶标仪预热 30min 以上，调节波长至 700nm，所有试剂解冻至室温（25℃）。
    ② 在 EP 管中依次加入：
    试剂名称（
    μL）
    测定管
    对照管
    试剂一
    100
    提取液
    100
    样本
    100
    试剂二
    100
    100
    试剂名称
    规格
    保存要求
    备注
    提取液
    提取液 80mL×1 瓶
    4℃保存
    试剂一
    粉体 mg×1 瓶
    4℃保存
    用前甩几下使试剂落入底部，再加
    8mL 提取液，混匀溶解备用。
    试剂二
    粉体×1 瓶
    -20℃保存
    用前甩几下使试剂落入底部，再加
    15mL 提取液，混匀溶解备用。
    试剂三
    液体 4mL×1 瓶
    4℃保存
    试剂四
    A:粉体 mg×1 瓶
    B:液体 2mL×1 瓶
    4℃保存
    临用前在试剂 A 中加 1.8mL 的 B 液，
    再加23.2mL的蒸馏水，混匀溶解备用。
    标准品
    粉体 mg×1 支
    4℃保存
    若重新做标曲，则用到该试剂本试剂盒仅供科研使用
    2
    37℃ 孵育 20min
    试剂三
    40
    40
    样本
    100
    混匀，12000rpm，4℃离心 5min，上清液待测
    ③ 显色反应：
    五、结果计算：
    1、标准曲线方程：y = 0.6402x - 0.0034，x 是标准品摩尔质量（
    μmol/mL）, y 是△A。
    2、按蛋白浓度计算：
    定义：每小时每毫克组织蛋白分解 ATP 产生 1μmol 无机磷的量为一个酶活力单位。
    酶活力(μmol/h/mg prot)=[(△A+0.0034)÷0.6402×V2]÷(V1×Cpr)÷T
    =15.93×(△A+0.0034)÷Cpr
    3、按样本鲜重计算：
    定义：每小时每克组织分解 ATP 产生 1μmol 无机磷的量为一个酶活力单位。
    酶活力(μmol/h/g 鲜重)=[(△A+0.0034)÷0.6402×V2]÷(W×V1÷V)÷T
    =15.93×(△A+0.0034)÷W
    4、按细菌或细胞密度计算：
    定义：每小时每 1 万个细菌或细胞分解 ATP 产生 1μmol 无机磷的量为一个酶活力单位。
    酶活力(μmol/h /104 cell)=[(△A+0.0034)÷0.6402×V2]÷(500×V1÷V)÷T=0.032×(△A+0.0034)
    5、液体中 Ca2+-ATPase 活力计算:
    定义：每小时每毫升液体分解 ATP 产生 1μmol 无机磷的量为一个酶活力单位。
    酶活力(μmol/h/mL)=[(△A+0.0034)÷0.6402×V2]÷V1÷T=15.93×(△A+0.0034)
    V---加入提取液体积，1mL；
    V1---加入样本体积，0.1mL ；
    V2---酶促反应总体积，0.34mL；
    T---反应时间，1/3 小时；
    W---样本鲜重，g；
    500---细菌或细胞总数，万；
    Cpr---样本蛋白质浓度，mg/mL；建议使用本公司的 BCA 蛋白含量检测试剂盒。
    附：标准曲线制作过程：
    1
    制备标准品母液（
    5μmol/mL）：标准品用 10mL 试剂一溶解。（母液需在两天内用）。
    2
    把母液稀释成六个浓度梯度的标准品：0, 0.2, 0.4, 0.6, 0.8, 1. μmol/mL。也可根据实际样本来调整
    标准品浓度。
    3
    依据显色反应阶段测定管的加样体系操作，根据结果即可制作标准曲线。
    上清液
    50
    50
    试剂四
    200
    200
    混匀，室温静置 3min，700nm 下读取各管吸光值，
    △A=A 测定-A 对照（每个样本做一个自身对照）。

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