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6-磷酸山梨醇脱氢酶(S6PDH)/醛糖6-磷酸还原酶(A6

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  • ￥820
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  • WS5750F
  • 国内
  • 2025年11月23日
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    • 英文名：

      6-Phosphate Sorbitol Dehydrogenase (S6PDH)/Aldose 6-Phosphate Reductase (A6PR)

    • CAS号：

      WS5750F

    • 保质期：

      3个月

    • 供应商：

      上海瓦兰生物

    • 保存条件：

      4℃

    • 规格：

      48T

    本试剂盒仅供科研使用
    6-磷酸山梨醇脱氢酶(Sorbitol-6-phosphate dehydrogenase）活性试剂盒说明书
    （货号：WS5750F 紫外法 48 样）
    一、产品简介：
    6-磷酸山梨醇脱氢酶（S6PDH，EC 1.1.1.200）又称醛糖 6-磷酸还原酶（Aldose-6-phos
    -phate reductase，A6PR），催化 D-山梨糖醇 6-磷酸和 D-葡萄糖 6-磷酸之间的相互转化。研
    究发现该酶在苹果叶片等蔷薇科植物中广泛分布，其在山梨醇合成中起着重要作用。
    6-磷酸山梨醇脱氢酶（S6PDH）催化 D-葡萄糖 6-磷酸还原，并使还原型辅酶Ⅱ（NADPH）
    氧化。因此，通过检测 340nm 下 NADPH 的下降速率，即可得出 S6PDH 的酶活性大小。
    该酶催化的反应：D-sorbitol 6-phosphate+NADP+=D-glucose 6-phosphate+NADPH+H+
    二、试剂盒组成和配制：
    试剂名称
    规格
    保存要求
    备注
    提取液
    液体 60mL×1 瓶
    4℃保存
    试剂一
    粉剂 mg×2 支
    4℃保存
    用前甩几下或离心使粉剂落入底部，
    每支分别加 0.6mL 蒸馏水溶解备用。
    用不完的试剂分装后-20℃保存，禁止
    反复冻融，三天内用完。
    试剂二
    液体 40mL×1 瓶
    4℃保存
    试剂三
    粉剂 mg×1 支
    4℃保存
    临用前甩几下使粉剂落入底部，再加
    1.1mL 蒸馏水溶解备用。
    三、所需的仪器和用品：
    紫外分光光度计、1mL 石英比色皿（光径 1cm）、台式离心机、水浴锅、可调式移液器、
    研钵、冰。
    四、6-磷酸山梨醇脱氢酶（S6PDH）活性测定：
    建议正式实验前选取 2 个样本做预测定，了解本批样品情况，熟悉实验流程，避免实验
    样本和试剂浪费！
    1、样本制备：
    称取约 0.1g 组织样本，加入 1mL 提取液，冰浴匀浆，12000rpm，4℃离心 10min，
    取上清，置冰上待测。
    【注】：若增加样本量，可按照组织质量（
    g）：提取液体积(mL)为 1：5~10 的比例进行提取。
    2、上机检测：
    ① 紫外分光光度计预热 30min 以上，调节波长至 340nm，蒸馏水调零。
    ② 所有试剂解冻至室温（25℃）。
    ③ 在 1mL 石英比色皿（光径 1cm）中依次加入：
    试剂名称（μL）
    测定管
    样本
    40
    试剂一
    20
    试剂二
    680
    混匀，室温（25℃）下孵育 10min
    试剂三
    20
    混匀，室温（25℃）下，于 340nm 处读取 A1，
    10min 后读取 A2。ΔA=A1-A2。
    【注】 1.若 10s 后反应体系未稳定可延长到 1min 再读值。本试剂盒仅供科研使用
    2
    2.若△A 在零附近，可适当延长反应时间 T 至 20min 或更长读取 A2，或适当加大样本量 V1
    （如增至 60μL，则试剂二相应减少），则改变后的 T 和 V1 需代入计算公式重新计算。
    4. 若起始值 A1 太大如超过 2（如颜色较深的植物叶片，一般色素较高，则起始值相对会偏
    高），可以适当减少样本加样量 V1，则改变后的 V1 需代入计算公式重新计算。
    或向待测样本中加少许活性炭混匀静置 5min 后 12000rpm, 4℃离心 10min，上清液用于检测；
    5. 若ΔA 大于 0.3，需减少反应时间 T（如减至 5min），则改变后的 T 需代入公式重新计算。
    6. 若下降趋势不稳定，可以每隔 30S 读取一次吸光值，选取一段线性下降的时间段来参与计
    算，相对应的 A 值也代入计算公式重新计算。
    五、结果计算：
    1、按样本蛋白浓度计算
    单位定义：每毫克组织蛋白在每分钟内氧化 1 nmol NADPH 定义为一个酶活力单位。
    S6PDH 活力(nmol/min/mg prot)=[ΔA×V2÷(ε×d)×109]÷(V1×Cpr) ÷T
    =305.5×ΔA÷Cpr
    2、按样本鲜重计算
    单位定义：每克组织在每分钟内氧化 1nmol NADPH 定义为一个酶活力单位。
    S6PDH 活力(nmol/min/g 鲜重)=[ΔA×V2÷(ε×d)×109]÷(W×V1÷V)÷T
    =305.5×ΔA÷W
    V---加入提取液体积，1 mL；
    V1---加入样本体积，0.04mL；
    V2---反应体系总体积，7.6×10-4 L；
    d---光径，1cm；
    ε---NADPH 摩尔消光系数，6.22×103 L / mol /cm；
    W---样本质量，g；
    T---反应时间，10min；
    Cpr---蛋白浓度（mg/mL），建议使用本公司的 BCA 蛋白含量测定试剂盒。

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