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土壤β-半乳糖苷酶(S-β-GAL)试剂盒

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  • ￥610
  • wksubio
  • WS8430F
  • 国内
  • 2025年12月23日
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    上海瓦兰生物科技有限公司
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    • CAS号：

      WS8430F

    • 保质期：

      3个月

    • 供应商：

      上海瓦兰生物

    • 保存条件：

      4℃

    • 规格：

      24T

    本试剂盒仅供科研使用
    土壤β-半乳糖苷酶（Solid-β-Galactosidase，S-β-GAL）试剂盒说明书
    （货号：WS8430F 分光法 24 样）
    一、产品简介：
    土壤β-半乳糖苷酶（
    β-GAL，EC 3.2.1.23)又称β-D-半乳糖苷半乳糖基转移酶，参与土
    壤中碳水化合物的水解。
    本试剂盒提供一种简单，灵敏，快速的测定方法，β-GAL分解对-硝*苯-β-D-吡喃半乳
    糖苷生成对-硝基*酚（PNP），后者在405nm有最大吸收峰，通过测定吸光值升高速率来
    计算β-GAL活性。
    二、试剂盒的组成和配制：
    试剂名称
    规格
    保存要求
    备注
    试剂一
    粉剂 mg×1 瓶
    -20℃保存
    临用前加入 4.5mL 蒸馏水，充分溶解
    备用，用不完的试剂仍-20℃保存；
    试剂二
    液体 20mL×1 瓶
    4℃保存
    试剂三
    液体 20mL×1 瓶
    4℃保存
    标准品
    粉剂×1 支
    4℃保存
    若重新做标曲，则用到该试剂
    三、所需的仪器和用品：
    可见分光光度计、1mL 玻璃比色皿(光径 1cm)、台式离心机、恒温振荡培养箱/水浴锅、
    可调式移液器、天平。
    四、土壤β-半乳糖苷酶（S-β-GAL）酶活检测：
    建议正式实验前选取 2 个样本做预测定，了解本批样品情况，熟悉实验流程，避免实
    验样本和试剂浪费！
    1、样本处理：
    取新鲜土样或干土（风干或者 37 度烘箱风干），先粗研磨，过 40 目筛网备用。
    【注】：土壤风干，减少土壤中水分对于实验的干扰；土壤过筛，保证取样的均匀细腻；
    2、测定步骤：
    ① 可见分光光度计预热 30min 以上，调节波长至 405nm，蒸馏水调零。
    ② 在 EP 管中依次加入：
    试剂名称（
    μL）
    测定管
    对照管
    空白管（仅做一次）
    土样（
    g）
    0.1
    0.1
    试剂一
    150
    150
    蒸馏水
    150
    试剂二
    300
    300
    300
    混匀， 37℃振荡反应 1h
    试剂三
    350
    350
    350
    混匀，12000rpm 室温离心 10min，取全部上清液转移至 1mL 玻璃比
    色皿（光径 1cm）中，405nm 下读取吸光值 A，△A=A 测定- A 对照-A
    空白（每个样本做一个自身对照）。
    【注】：1.若ΔA 在零附近徘徊，可延长 37℃的孵育时间 T（如增至 4 小时或更长），或增加土样质
    量 W（如增至 0.2g）。则改变后的 T 和 W 需代入计算公式重新计算。
    2.若测定管 A 值大于 1.5 或△A 大于 1.5，可缩短 37℃的孵育时间 T（如减至 0.5 小时或更短）。
    则改变后 T 需代入计算公式重新计算。或对最后一步的待检测上清液（包括测定管、对照管
    和空白管）同时用蒸馏水进行稀释，稀释倍数 D 代入计算公式。本试剂盒仅供科研使用
    2
    五、结果计算：
    1、标准曲线方程为 y = 0.1461x + 0.0087；x 为标准品质量（
    μg），y 为△A。
    2、单位定义：每小时每克土样中产生 1nmol 对-硝基*酚（PNP）定义为一个酶活单位。
    S-β-GAL 活力(nmol/h/g 土样)=(ΔA-0.0087)÷0.1461÷Mr×103÷W÷T×D
    =49.2×(ΔA-0.0087)÷W×D
    T---反应时间，1h；
    W---实际称取土样质量，g；
    Mr--- PNP 相对分子质量，139.11；
    D---稀释倍数，未稀释即为 1。
    附：标准曲线制作过程：
    1 制备标准品母液（1mg/mL）：向标准品 EP 管里面加入 1mL 蒸馏水。
    2 把母液稀释成以下浓度梯度的标准品：0, 0.1, 0.2, 0.3, 0.4, 0.5 mg/mL。也可根据实际
    样本来调整标准品浓度。
    3 在 EP 管依次加入：20μL 标准品+130μL 蒸馏水+300μL 试剂二+350μL 试剂三，混匀，
    全部上清液转移至 1mL 玻璃比色皿（光径 1cm）中，于 405nm 下读取吸光值。
    4 根据结果制作标准曲线。

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