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- WS0450F
- 国内
- 2025年12月04日
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- 详细信息
- 技术资料
- 库存：
大量
- 英文名：
Starch Debranching Enzyme (DBE) Kit
- CAS号：
WS0450F
- 保质期：
3个月
- 供应商：
上海瓦兰生物
- 保存条件：
4℃
- 规格：
24T
本试剂盒仅供科研使用
淀粉脱分支酶（Starch debranching enzyme，DBE）试剂盒说明书
（货号：WS0450F 分光法 24 样）
一、产品简介：
淀粉去分支酶(DBE)（EC 3.2.1.68）属于淀粉水解酶家族，特异性地水解支链淀粉的
α-1，6 糖苷键，产生线性的葡萄糖链，在调整支链淀粉分子的链长方面有重要的作用。
采用 3，5-二硝基水杨酸法测定 DBE 催化支链淀粉产生的还原糖，通过测定还原糖
含量的变化来得到 DBE 酶活性大小。
二、试剂盒组分与配制
试剂名称
规格
保存要求
备注
提取液
液体 30mL×1
瓶
4℃保存
试剂一
液体 25mL×1
瓶
4℃保存
试剂二
粉剂 mg×1 瓶
4℃保存
临用前甩几下，使试剂落入底部，再加
18mL 试剂一，于 80℃水浴锅中溶解呈透
明状态，待冷却后使用。
试剂三
液体 25mL×1
瓶
4℃保存
试剂四
液体 8mL×1 瓶
4℃保存
标准品
粉剂 mg×1 支
4℃保存
若重新做标曲，则用到该试剂
三、所需的仪器和用品：
可见分光光光度计、1mL 玻璃比色皿（光径 1cm）、可调式移液器、水浴锅、台式离
心机、研钵、冰、蒸馏水
四、淀粉脱分支酶（DBE）活性检测：
建议正式实验前选取 2 个样本做预测定，了解本批样品情况，熟悉实验流程，避免实验
样本和试剂浪费！
1、样本制备：
称取约 0.1g 组织，加入 1mL 提取液，进行冰浴匀浆。12000rpm，4℃离心 10min，取
上清，置冰上待测。
【注】：若增加样本量，可按照组织质量（
g）：提取液体积(mL)为 1：5~10 的比例进行提取
2、上机检测：
1 可见分光光光度计预热 30min 以上，调节波长到 540 nm，蒸馏水调零。
2 在 EP 管中依次加入：
试剂名称（μL）
测定管
对照管
样本
30
30
（95℃煮沸 10min 的酶液）
试剂二
300
300
37℃孵育 30min
试剂三
420
420
试剂四
150
150
混匀，95℃显色 10min 后，流水冷却至室温后，全部液体转移至 1mL
玻璃比色皿中，于 540nm 处读取吸光值 A，ΔA＝A 测定-A 对照。
【注】若ΔA 差值较小，可加大样本量，或延长孵育时间至 1 小时或更长。本试剂盒仅供科研使用
2
则改变后的加样量 V1 或反应时间 T 需重新代入公式计算。
五、结果计算：
1、标准曲线：y=2.207x-0.0238，x 是标准品质量（mg），y 是ΔA。
2、按照蛋白浓度计算
酶活定义：每毫克组织蛋白每小时水解支链淀粉产生 1mg 还原糖（以麦芽糖计）定义为
一个酶活力单位。
DBE 活力(mg/h/mg prot)=[ (ΔA+0.0238)÷2.207]÷(V1×Cpr)÷T
=30.21× (ΔA+0.0238) ÷Cpr
3、按样本鲜重计算
酶活定义：每克组织每小时水解支链淀粉产生 1mg 还原糖（以麦芽糖计）定义为一个酶
活力单位。
DBE 活力(mg /h/g 鲜重)=[ (ΔA+0.0238)÷2.207]÷(W×V1÷V)÷T
=30.21× (ΔA+0.0238) ÷W
V----加入提取液体积，1 mL；
V1----反应中样品体积，30μL=0.03mL；
W----样品质量，g；
T----反应时间，30min=0.5h；
Cpr---样本蛋白质浓度，mg/mL，建议使用本公司的 BCA 蛋白含量检测试剂盒；
附：标准曲线制作过程：
1 制备标准品母液（50mg/mL）：临用前加 1mL 蒸馏水，充分溶解混匀。
2 把母液稀释成以下浓度梯度的标准品：0,5,10,15,20, 25mg/mL。也可根据实际样本来
调整标准品浓度。
3 按照测定管加样体系操作，依据结果即可制作标准曲线。
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淀粉去分支酶(DBE)试剂盒
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