本试剂盒仅供科研使用
α-L-鼠李糖苷酶(α-L-rhamnosidase)活性测定试剂盒说明书
（货号:WS0850F 分光法 24 样）
一、产品简介：
α-L-鼠李糖苷酶（α-L-rhamnosidase，EC 3.2.1.40）是一种水解酶，可以水解人们日常
饮食中常见的黄酮苷类化合物。该酶广泛分布于自然界的细菌和真菌等生物中。它在工业
上具有许多潜在的应用价值。
本试剂盒采用对硝*酚-α-鼠李糖苷(PNP R)作为底物，生成黄色的对硝基*酚（PNP），
该产物在 405nm 处有最大吸收峰。通过检测 PNP 在 405nm 下的增加速率，即可得到α-L-
鼠李糖苷酶活性的大小。
二、试剂盒的组成和配制：
试剂名称
规格
保存要求
备注
提取液
液体 30mL×1 瓶
4℃保存
试剂一
粉剂 mg×1 支
-20℃保存
临用前甩几下或离心使试剂落
入底部，再加 2.2mL 蒸馏水溶
解混匀，若难溶解可超声溶解。
试剂二
液体 20mL×1 瓶
4℃保存
试剂三
液体 20mL×1 瓶
4℃保存
标准品
粉剂 mg×1 支
4℃保存
若重新做标曲，则用到该试剂
三、所需的仪器和用品：
可见分光光度计、1mL 玻璃比色皿（光径 1cm）、低温离心机、水浴锅、可调式移液
器、恒温培养箱、研钵、蒸馏水。
四、α-L-鼠李糖苷酶活性测定：
建议正式实验前选取 2 个样本做预测定，了解本批样品情况，熟悉实验流程，避免实验
样本和试剂浪费！
1、样本制备：
① 组织样本：取约 0.1g 组织，加入 1mL 提取液，进行冰浴匀浆，4℃×12000rpm 离心
15min，取上清液待测。
【注】：若增加样本量，可按照组织质量（
g）：提取液体积(mL)为 1：5~10 的比例提取。
② 细菌/细胞样本：
先收集细菌或细胞到离心管内，离心后弃上清；取约 500 万细菌或细胞加入 1mL
提取液，超声波破碎细菌或细胞（冰浴，功率 200W，超声 3s，间隔 10s，重复 30 次）；
12000rpm 4℃离心 10min，取上清，置冰上待测。
【注】：若增加样本量，可按照细菌/细胞数量（104）：提取液（mL）为 500~1000：1 的比例进行提取。
③ 液体样本：可直接测定，或者适当稀释后测定。若浑浊，离心后取上清检测。
2、上机检测：
① 可见分光光度计预热 30 min，调节波长为 405nm，蒸馏水调零。
② 所有试剂于 40℃水浴中预热 20 min。
③ 在 1mL 玻璃比色皿（光径 1cm）中依次加入下列试剂：
试剂名称（μL）
测定管
对照管
样本
40
40
试剂一
80
试剂二
280
360本试剂盒仅供科研使用
2
迅速混匀，40℃保温 20min
试剂三
400
400
混匀，液体全部转移至 1mL 玻璃比色皿（光径 1cm）中，
立即于 405nm 下读取吸光值 A，ΔA=A 测定-A 对照（每个
测定管需设一个对照管）。
【注】：①若△A 的值非常低在零附近，可增加样本量 V1（如增至 80μL，则试剂二相应减少）或
延长反应时间 T（如增至 30min 或更长），则重新调整的 V1 和 T 须代入公式重新计算。
②若△A 的值超过 1，则需要稀释样本，稀释倍数 D 代入计算公式；
五、结果计算：
1、标准曲线：y = 21.604x - 0.0022，x 是标准品（PN P）摩尔质量：μmol；y 是△A。
2、按照样本质量计算：
酶活定义：在 40℃下，每克组织每小时水解 1μmoLPNP R 产生 PNP 定义为 1 个酶活单位。
α-L-鼠李糖苷酶(μmol/h/g 鲜重)=[(△A+0.0022)÷21.604]÷(W×V1÷V)÷T×D
=3.47×(△A +0.0022)÷W×D
3、按照样本蛋白浓度计算：
酶活定义：在 40℃下，每毫克蛋白每小时水解 1μmoLPNP P 产生 PNP 定义为 1 个酶活单位。
α-L-鼠李糖苷酶(μmol/h/mg prot)=[(△A+0.0022)÷21.604]÷(Cpr×V1)÷T×D
=3.47×(△A +0.0022)÷Cpr×D
4、按细胞数量计算：
酶活定义：在 40℃下，每 104个细胞每小时水解 1μmoLPNP P 产生 PNP 定义为 1 酶活单位。
α-L-鼠李糖苷酶(μmol/h/104 cell)=[(△A+0.0022)÷21.604]÷(500×V1)÷T×D
=0.007×(△A +0.0022)×D
5、按液体体积计算：
酶活定义：在 40℃下，每毫升液体每小时水解 1μmoLPNP P 产生 PNP 定义为 1 个酶活单位。
α-L-鼠李糖苷酶(μmol/h/mL)= [(△A+0.0022)÷21.604]÷V1÷T×D =3.47×(△A +0.0022)
W---样品质量，g；
V---提取液体积，1 mL；
V1---上清液体积（mL），0.04mL；
T---反应时间，20 min=1/3h；
D---稀释倍数，未稀释即为 1；
Cpr---上清液蛋白质浓度，mg/mL；建议使用本公司的 BCA 蛋白质含量测定试剂盒。
附：标准曲线制作过程：
1
制备标准品母液（10μmol /ml）：向标准品 EP 管里面加入 1mL 蒸馏水溶解，若有结晶析出，需 37℃
水浴至完全溶解。
2
把母液稀释成以下浓度梯度的标准品：0, 0.2, 0.4, 0.6, 0.8, 1μmol/ml。也可根据实际样本来调整标
准品浓度。
3
依据 40ul 的标准品+360ul 的试剂二，再加 400ul 的试剂三，于 405nm 处读值；根据结果即可制作
标准曲线。
文献和实验
