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- 2025年10月11日
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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 库存：
100
- 英文名：
/
- 保质期：
1年
- 供应商：
上海晅科生物科技有限公司
- 保存条件：
-20℃
- 规格：
50次
荧光定量PCR( realtime fluorescence quantitative PCR，RTFQ PCR) 是1996 年由美国Applied Biosystems 公司推出的一种新定量试验技术，它是通过荧光染料或荧光标记的特异性的探针，对PCR产物进行标记跟踪，实时在线监控反应过程，结合相应的软件可以对产物进行分析，计算待测样品模板的初始浓度。为此本公司开发了简单快捷的转基因元件ORF25终止子PCR试剂盒。
产品特点：
1. 即开即用，用户只需要提供 DNA 模板。
2. 引物经过精心优化，专一性强，只扩增转基因元件ORF25终止子。
3. 提供阳性对照，便于区分假阴性样品。
4. PCR mix 中含上样染料，PCR 后可以直接上样电泳。
5. 本试剂盒足够做 40μL 体系的 PCR 50 次，但只能用于科研。
转基因元件ORF25终止子PCR试剂盒包装规格及成分：
| 编号 |
成分 |
规格 |
| 试剂一 |
PCR MagicMix 3.0 | 1 mL（红盖） |
| 试剂二 |
超纯水 | 1 mL（亮黄色） |
| 试剂三 |
转基因元件ORF25终止子PCR 引物混合液 | 100 μL（白盖） |
| 试剂四 |
转基因元件ORF25终止子PCR 阳性对照 （1×10E8 拷贝/μL） | 50 μL（黄盖） |
| 试剂五 |
使用手册 | 1 份 |
运输及保存：低温运输，-20℃保存，保存期限为一年。阳性对照需要单独放置，不要污染其 他试剂。
自备试剂：DNA 模板
使用方法：
一、样品 DNA 的制备
1. 用自选方法纯化 N+2 个样品的 DNA，本试剂盒跟市场上大多数核酸提取试剂盒兼容。
2. 如果有 N 个样品，则需要做 N+2 个提取，包括一个样品制备阳性对照和一 个样品制备阴性对照。样品制备阳性对照是在适量水（取决于试剂盒要求 的样品起始量）中加 10μL 转基因元件ORF25终止子 PCR 阳性对照的 1000 倍稀释液 而得，样品制备阴性对照是直接用水。提取结束后最后得到模板 DNA 放冰 上待用。
二、设置 PCR 反应（40μL 体系）
3. 对 N+2 个样品，在 PCR 时需要增加一个 PCR 阳性对照和一个 PCR 阴性 对照，故需要设置 N+4 个反应。在 N+4 个 PCR 管中分别加入下列成分：
| 成分 | N+2 个 样品管 | PCR 阴性 对照 | PCR 阳性 对照 |
| PCR Magic Mix 3.0 | 各 20 μL | 20 μL | 20 μL |
| 转基因元件ORF25终止子 PCR 引物 混合液 | 各 2 μL | 2 μL | 2 μL |
| N+2 个样品 DNA 模板 | 各 18 μL | ||
| PCR 阴性对照（水） | 18 μL | ||
| PCR 阳性对照（转基因元件ORF25终止子 PCR 阳性对照的 1000 倍稀释液） | 18 μL |
4. 按下表设置 PCR 反应：
| 过程 | 温度 | 时间 |
| 预变性 | 95℃ | 5 min |
| PCR 反应 （35 个循环） | 95℃ | 30 sec |
| 55℃ | 30 sec | |
| 72℃ | 30 sec | |
| 最后延伸 | 72℃ | 7 min |
三、电泳检测 5. 取 10-20 μL PCR 产物。1%琼脂糖凝胶电泳检测 PCR 产物。本产品提供的 PCR Mix 在扩增结束后可以直接上样，不需要另外再加 loading buffer。阳性对照必须有预期条带出现，阴性对照必须无任何扩增，否则实 验无效。对没有扩增产物的样品，可以稀释 10 倍后重复 PCR 扩增以排 除 PCR 抑制剂的感染。
转基因元件ORF25终止子PCR试剂盒相关产品：
| 产品名称 |
方法 |
产品规格 |
价格 |
| 转基因元件ORF25终止子LAMP试剂盒 | LAMP |
50次 |
2490 |
| 转基因元件ORF25终止子PCR试剂盒 | PCR |
50次 |
1990 |
| 转基因元件ORF25终止子染料法荧光定量PCR试剂盒 | 染料法 |
50次 |
2490 |
| 转基因元件ORF25终止子探针法荧光定量PCR试剂盒 | 探针法 |
50次 |
2990 |
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文献和实验源序列，这些序列通常不存在于野生型植物中。其中，这两个外源的DNA序列与花椰菜花叶病毒的35S启动子和根癌农杆菌的NOS终止子整合在一起。假如这两个序列的任一个被扩增出来，则表明外源基因已经转化入植物基因组中。原则上所有已批准的转基因农作物都是用含有这两个元件或其中任一个的构建载体转化的。对于一些在转基因构建载体中新使用的启动子和终止子序列的检测，逐渐成为科学家们关注的焦点。目前，已经设计了一些针对不同大小产物的引物对。表1为合成的引物序列，选择退火位点生成单一DNA片段，以便于结果的分析。PCR反应
感谢您的积极参与！ 银染背景深怎么回事 此引物设计是否合理 RNA 2100bp,ORF框1600bp 如何设计引物 求教长链PCR扩增的问题 哪位有35S启动子和 Nos 终止子的比较成熟的引物序列 求助关于制作和应用PCR诊断试剂盒方面的资料 MSP中醋酸铵用法 MSP不见条带 做病毒的基因的RT－PCR能否用oligo（dt）？ 急需有关基因测序方面的问题和测序仪发展史 多重pcr上下游引物Tm不同，该如何安排反应体系 扩不出目的片段 这个小序列
转录所需要的全部元件。 8、Pol III 终止子 Pol III终止子（ Pol III terminator）；4个或者更多个T,提供Pol III依赖的转录终止。 9、U6 启动子 U6 启动子（U6 promoter）一种pol III型启动子，允许产生确定末端的小RNA(参看pol III启动子)。 10、入门载体 （entry vector） 包含attL位点，用来克隆DNA片段的Gateway®载体。U6入门载体, pENTR®/U6，专门设计使用U6 pol
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