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土壤亮氨酸氨基肽酶(S-LAP)测试盒,微板法

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  • ￥1440 - 2250
  • wksubio
  • WS9230W
  • 国内
  • 2025年10月28日
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    • 英文名：

      Soil Leucine aminopeptidase (S-LAP) test box

    • CAS号：

      WS9230W

    • 保质期：

      3个月

    • 供应商：

      上海瓦兰生物

    • 保存条件：

      4℃

    • 规格：

      48T/96T

    规格：48T产品价格：￥1440.0
    规格：96T产品价格：￥2250.0
    本试剂盒仅供科研使用
    土壤亮氨酸氨基肽酶（Solid-Leucine Aminopeptidase,S-LAP）
    试剂盒说明书
    （货号:WS9230W 微板法 96 样）
    一、产品简介：
    土壤亮氨酸氨基肽酶（LAP，EC 3.4.11.1）是一类能水解肽链 N-末端为亮氨酸的酶，
    由土壤微生物分泌。该酶活性变化与机体某些病理状态密切相关。
    土壤亮氨酸氨基肽酶（S-LAP）分解 L-亮氨酰对硝*苯胺生成对硝基*胺，该物质在
    405nm 有最大吸收峰，通过测定吸光值升高速率来计算 S-LAP 活性。
    二、试剂盒组分与配制：
    试剂名称
    规格
    保存条件
    备注
    试剂一
    液体 120mL×1 瓶
    4℃保存
    试剂二
    粉剂 mg×2 支
    -20℃保存
    临用前甩几下，使试剂落入底
    部，再加 2.7mL 乙醇混匀溶解。
    试剂三
    液体 70mL×1 瓶
    4℃保存
    标准品
    粉剂 mg×1 支
    4℃保存
    若重新做标曲，则用到该试剂。
    三、所需的仪器和用品：
    酶标仪、96 孔板、台式离心机、恒温振荡培养箱/水浴锅、可调式移液器、天平。
    四、土壤亮氨酸氨基肽酶（S-LAP）活性测定：
    建议正式实验前选取 2 个样本做预测定，了解本批样品情况，熟悉实验流程，避免实
    验样本和试剂浪费！
    1、样本处理：
    取新鲜土样或干土（风干或者 37 度烘箱风干），先粗研磨，过 40 目筛网备用。
    【注】土壤风干，减少土壤中水分对于实验的干扰；土壤过筛，保证取样的均匀细腻；
    2、上机检测：
    ① 酶标仪预热 30min 以上，调节波长至 405nm。
    ② 在 EP 管中依次加入：
    试剂名称（
    μL）
    测定管
    对照管
    空白管（仅做一次）
    土样（
    g）
    0.05
    0.05
    试剂一
    450
    500
    450
    试剂二
    50
    50
    充分混匀，37℃培养 1 小时（振荡培养或间隔 20min 手动振荡混匀
    几下）
    试剂三
    300
    300
    300
    混匀，8000rpm 离心 5min（若上清液不澄清可加大离心力），取 200μL
    上清液至 96 孔板中，405nm 下读取吸光值 A，△A=A 测定- A 对照-A
    空白（每个样本做一个自身对照）。
    【注】：1.若ΔA 较小，可延长 37℃的孵育时间 T（如增至 4 小时或更长），或增加土样质
    量 W（如增至 0.2g）。则改变后的 T 和 W 需代入计算公式重新计算。
    2.若测定管 A 值大于 1.5 或△A 大于 1.5，可缩短 37℃的孵育时间 T（如减至 0.5 小时或更短）。
    则改变后 T 需代入计算公式重新计算。或对最后一步的待检测上清液（包括测定管、对照管
    和空白管）同时用蒸馏水进行稀释，稀释倍数 D 代入计算公式。本试剂盒仅供科研使用
    2
    五、结果计算：
    1、标准曲线方程：y = 0.0078x - 0.0024；x 为标准品摩尔质量（nmol），y 为△A。
    2、单位定义：每小时每克土样生成 1 nmol 对硝基*胺定义为一个酶活力单位。
    S-LAP(nmol/h/g 土样)=(ΔA+0.0024)÷0.0078÷W÷T×D=128.2×(ΔA+0.0024)÷W×D
    T---反应时间，1h；
    W---土壤样本实际取样量，g。
    D---稀释倍数，未稀释即为 1。
    附：标准曲线制作过程：
    1 制备标准品母液（10μmol/mL）：临用前甩几下或离心，使粉体落入底部，加入 0.5mL
    乙醇，涡旋震荡溶解后再加入 0.5mL 的蒸馏水混匀，得到 10μmol/mL 备用。
    2 把母液用蒸馏水稀释成以下浓度：0,0.4,0.8,1.2,1.6, 2μmol/mL。也可根据实际样本来
    调整标准品浓度。
    3 在 EP 管依次加入：50μL 标准品+450μL 试剂一+300μL 试剂三，混匀，取 200μL 至
    96 孔板中，于 405nm 下读取吸光值，根据结果制作标准曲线。

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