- ￥6500
- 爱必信(absin)
- abs9589
- 上海
- 2025年07月10日
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- 详细信息
- 技术资料
- 品系：
-
- 细胞类型：
-
- 肿瘤类型：
-
- 供应商：
爱必信(上海)生物科技有限公司
- 库存：
现货
- 生长状态：
-
- 年限：
4°C保存，有效期3个月；-20°C保存，有效期1年，详见标签
- 运输方式：
4°C保存，有效期3个月；-20°C保存，有效期1年，详见标签
- 器官来源：
-
- 是否是肿瘤细胞：
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- 细胞形态：
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- 免疫类型：
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- 物种来源：
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- 相关疾病：
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- 组织来源：
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- 英文名：
Human Nasopharyngeal Carcinoma Organoid Culture Medium Kit
- 规格：
1kit
| 产品描述 | |||||||||||||||||
| 描述 | 试剂盒组成：
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| 使用方法 | 1、原代 （1）取材后的组织须放在预冷的（2-8°C）组织保存液 E 的取样瓶中，快速转运至洁净实验室进行组织处理和细胞分离，拍照并登记信息。 （2）准备若干培养皿，加入 4℃预冷的原代培养缓冲液 B 备用。 （3）取样瓶消毒，将组织放入培养皿中，利用原代培养缓冲液 B 清洗三次后，利用眼科剪或手术刀将组织剪切成体积约为 1-3mm3 的组织块。 （4）组织用人鼻咽癌原代组织消化液 C 消化，37℃震荡消化10-20min，（消化过程中随时观察消化情况）。 （5）取少量液体在显微镜下观察，镜下观察到较多的单个细胞或 70um 以下的细胞簇后，加入三倍体积原代培养缓冲液 B 终止消化。 （6）使用100um孔径的筛网进行过滤，将滤液收集后，于300g富集离心5min后移去上清，添加原代培养缓冲液 B 重新重悬离心。 （7）基质胶计算：第6步后观察收集到的组织体积，添加25倍组织体积的基质胶（abs9495）重悬铺板。 （8）24孔细胞培养板为例，每孔点胶25ul组织基质胶混合物进行铺板（4℃下操作）。 （9）将铺好的培养板放入37℃培养箱中10-15min成胶，添加人鼻咽癌类器官培养基 A（恢复室温）进行培养。 2、类器官传代培养 （1）移液器吸去培养基，每孔添加1-2ml 4℃类器官传代培养缓冲液 G 放置2min。 （2）移液抢轻柔吹打基质胶，收集在15ml离心管中，4℃静置10min。（每6-8孔为一组） （3）a：类器官数量不足或体积较小时： 离心5min弃去上清，添加适量类器官传代培养缓冲液 G 重悬移入1.5ml离心管，300g离心5min弃去液体进行第4步。 b：类器官数量较多或体积较大时：离心5min弃去上清，添加适量类器官传代消化液 D 消化2-3min，添加类器官传代培养缓冲液 G 终止消化，离心5min弃去混合液，添加适量类器官传代培养缓冲液 G 重悬移入1.5ml离心管，300g离心5min弃去液体进行第4步。 （4）类器官收集后，添加基质胶重悬，每孔25ul基质胶铺在24孔细胞培养板中，放置培养箱中10-15min添加500ul人鼻咽癌类器官培养基 A。 3、类器官冻存 （1）移液器吸去培养基，每孔添加1-2ml 4℃类器官传代培养缓冲液 G 放置2min。 （2）移液抢轻柔吹打基质胶，收集在15ml离心管中，4℃静置10min。（每6-8孔为一组） （3）离心5min弃去上清，添加适量类器官传代培养缓冲液 G 再次重悬，300g离心5min弃去液体。 （4）添加适量类器官冻存液 F，轻柔吹打重悬，以24孔细胞培养板为例：密度为2个孔冻存1管，每管体积1.4ml。 （5）做好标记信息，进行程序降温后，移入液氮长期保存。 4、类器官复苏 （1）取10ml类器官传代培养缓冲液 G 于15ml离心管中。 （2）从液氮罐中取出冻存的类器官细胞，快速置于 37℃水浴锅中融解。 （3）水浴融解过程中，需轻轻摇动冷冻管，以确保冻存液在 1-2min内完全融解。 （4）将溶解后的类器官细胞快速转移至15ml 离心管，使用移液管轻轻吹打6-8次，300g 离心 5min，然后除去上清液并收集类器官细胞沉淀。添加适量类器官传代培养缓冲液 G 重悬移入1.5ml离心管300g离心5min。 （5）基质胶重悬，每孔25ul基质胶铺在24孔细胞培养板中，放置培养箱中10-15min成胶，添加500ul人鼻咽癌类器官培养基 A。 |
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| 储存/保存方法 | 4°C保存，有效期3个月；-20°C保存，有效期1年，详见标签。 |
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