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原位杂交(ISH)
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上海威奥生物
收费标准:100/张
结果内容:包埋好的蜡块
备注:客户提供蜡块或者切片及原位杂交试剂盒,公司也可代购试剂盒
在细胞或组织结构保持不变的条件下,用标记的已知的寡核苷酸探针,按核酸杂交中碱基配对原则,与待测细胞或组织中相应的基因片段相结合(杂交),所形成的杂交体 经显色反应后在光学显微镜或电子显微镜下观察其细胞内相应的RNA分子。原位杂交步骤:1.玻片处理;
2.组织处理;
3.切片处理;
4.灭活;
5.暴露 mRNA 核酸片段(消化);
6.预杂交;
7.杂交;
8. 杂交后洗涤;
9. 封闭;
10. 加生物素化鼠抗地高芯;
11. SABC显色;
12.滴加生物素化过氧化物酶;
13. DAB 显色;
14. 复染;
注意事项:
1、固定时间越长,mRNA破坏的越多;做原位杂交组织固定时间不宜过长,一般24h。
2、在整个杂交前处理过程都需戴消毒手套,避免RNA污染。
3、蛋白酶K的用量和作用时间要严格把握。
4、杂交后的洗涤均有助于减低背景染色,遵循盐溶液浓度由高到低而温度由低到高的原则。
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