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RIP(RNA 结合蛋白免疫沉
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RIP(RNA 结合蛋白免疫沉淀)
上海威奥生物
用抗体或表位标记物捕获细胞核内或细胞质中内源性的RNA结合蛋白。防止非特异性的RNA的结合。免疫沉淀把RNA结合蛋白及其结合的RNA一起分离出来。结合的RNA序列通过microarray(RIP-Chip),定量RT-PCR或高通量测序(RIP-Seq)方法来鉴定。
RIP 技术(RNA Binding Protein Immunoprecipitation Assay,RNA 结合蛋白免疫沉淀)主要是运用针对目标蛋白的抗体把相应的RNA-蛋白复合物沉淀下来,经过分离纯化就可以对结合在复合物上的RNA 进行q-PCR验证或者测序分析。RIP 是研究细胞内RNA 与蛋白结合情况的技术,是了解转录后调控网络动态过程的有力工具。RIP可以看成是普遍使用的染色质免疫沉淀ChIP技术的类似应用,但由于研究对象是RNA-蛋白复合物而不是DNA-蛋白复合物,RIP实验的优化条件与ChIP实验不太相同,如:RIP反应体系中的试剂和抗体绝对不能含有RNA酶,抗体需经RIP实验验证等等。
RIP实验步骤
一、获取细胞裂解液
二、制备磁珠-抗体
三、RNA结合蛋白免疫沉淀
四、RNA纯化
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