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- miRNA通过碱基配对结合到靶mRNA的3’UTR区，抑制靶基因的翻译或对靶基因mRNA的降解达到调控基因表达的目的。
- 浙江省
- 2025年07月13日
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XSL
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双荧光素酶检测
双荧光素酶报告基因检测介绍
实验原理
miRNA通过碱基配对结合到靶mRNA的3’UTR区，抑制靶基因的翻译或对靶基因mRNA的降解达到调控基因表达的目的。将靶mRNA的3’UTR区构建至萤火虫荧光素酶报告基因的3’端，与miRNA表达载体及海肾荧光素酶报告基因载体共转染细胞，先后加入两种底物荧光素，通过对荧光素酶报告基因的表达检测确认 miRNA对靶基因的调控效果。
下图为双荧光素酶报告基因检测载体的示意图。
技术应用
通过miRNA靶标的鉴定从而进行miRNA功能的深入研究。
实验流程
实验结果展示
筛选结果
告基因质粒，结果表明待研究的 miRNA 对靶基因有较明显的调控作用。
实验原理
miRNA通过碱基配对结合到靶mRNA的3’UTR区，抑制靶基因的翻译或对靶基因mRNA的降解达到调控基因表达的目的。将靶mRNA的3’UTR区构建至萤火虫荧光素酶报告基因的3’端，与miRNA表达载体及海肾荧光素酶报告基因载体共转染细胞，先后加入两种底物荧光素，通过对荧光素酶报告基因的表达检测确认 miRNA对靶基因的调控效果。
下图为双荧光素酶报告基因检测载体的示意图。
技术应用
通过miRNA靶标的鉴定从而进行miRNA功能的深入研究。
实验流程
实验结果展示
筛选结果
- 四组质粒的 293 细胞共转染后的细胞照片；
- 四组细胞的双荧光素酶报告基因检测柱形图。
告基因质粒，结果表明待研究的 miRNA 对靶基因有较明显的调控作用。
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文献和实验相关实验
待检测基因-Luc/Rluc的重组质粒；2、细胞系选择: 根据实验需要选择细胞株，通常选择转染效率较高的293T细胞或原代细胞等；3、共转染: 将带有Luc/Rluc标记的报告基因和目的基因进行共转染，设置不同的检测时间点，一般为24h/48h；4、外界干预: 转染后，可进行物理/化学/病毒等的相应刺激；5、细胞处理: 采用进口/国产双荧光素酶检测试剂盒依照protocol操作；6、荧光检测: 使用GENios Pro 酶标仪或具有类似检测功能的设备进行荧光强度检测。三、荧光素酶报告基因的优点
IntroductionLuciferase can be used as a reporter gene to measure the activity of promoters, and/or the transfection efficiency.AimsYou will be provided with the HEK293/COS cells that you transfected on Monday. Working in groups
1、双荧光素酶实验原理； 2、验证转录因子与启动子互作； 3、验证miRNA与mRNA互作
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