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- 浙江省
- 2025年07月13日
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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 提供商：
XSL
- 服务名称：
细胞成脂、成骨、成神经诱导实验服务
实验操作流程：
成骨诱导培养液配备与诱导操作：
1、准备含10%FBS的α-MEM培养液；
2、在备好的α-MEM培养液中添加50μM 抗坏血酸, 10mmβ-磷酸甘油和100nm地塞米松；
3、准备6孔培养板，将P4细胞按照5×103个/平方厘米的规格接种于原始α-MEM培养液中；
4、待细胞长至基本融合后，更换上述制备完成的成骨诱导培养液；
5、每三天换液一次，细胞长至7天时进行碱性磷酸酶染色；
6、二十八天后再进行矿化结节的茜素红染色。
素红染色方法介绍：
1、去除细胞当前使用培养液，使用PBS清洗两次；
2、使用10%甲醛室温固定15分钟，完成后使用重蒸馏水冲洗两次；
3、按照1ml/孔加入40mM的茜素红染色液，室温孵育20min并轻微振荡；
4、清除掉没有完全结合的染料，用重蒸馏水漂洗并振荡5min重复4次；
5、倾斜放置2min,吸取多余的重蒸馏水；倒置显微镜观察拍照记录。
成脂诱导培养液配备与诱导操作：
1、配置FBS10%含量的HG-DMEM培养液；
2、在配制完成的HG-DMEM培养液中加入1μM地塞米松,10μg/ml胰岛素，200μM吲哚美辛和0.5mM IBMX；
3、准备6孔培养板，将P4细胞按照2×104个/平方厘米的规格接种于原始HG-DMEM培养液中
4、待细胞长至基本融合后，更换上述制备完成的成脂诱导培养液培养2天，在用只含有10μg/ml胰岛素的 成脂维持培养液培养1天，如此交替循环培养至14天，使用红油O染色。 红油O染色方法介绍：
1、去除细胞使用的当前培养液，使用PBS清洗两次；
2、27.5%甲醛室温固定20分钟；
3、重蒸馏水清洗3此，空气中干燥；
4、加入0.5%的红油室温孵育一小时；
5、配制70%乙醇溶液清洗3次；
6、倒置显微镜观察拍照记录。
实验注意事项：
客户提供： 细胞种类和诱导分化细胞类型。
交付标准：
1、成功定向诱导分化的细胞。
2、完整项目报告（材料、试剂、仪器、方法、数据分析、实验结果）。
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文献和实验（1）待干细胞达到80~90%融合时，消化。（2）将干细胞接种于六孔板中，每孔约3x103个细胞，加入2ml / 孔干细胞完全培养液。放入37°C，5% CO2孵箱中培养。（3）24h后，移去旧的培养液，加入2ml孔成骨诱导液。（4）每三天换液，诱导2-3周。（5）2-3周后，钙结节形成，进行茜素红染色。二、成脂诱导体系：1. 试剂成脂诱导液A：DMEM+10%FBS，双抗，谷氨酰胺，诱导因子：胰岛素，IBMX，地塞米松，吲哚美锌。成脂诱导液B：DMEM+10%FBS，双抗，谷氨酰胺，诱导因子：胰岛
向多种神经细胞如神经元、神经胶质细胞分化。不仅如此，SKP还能向部分中胚层细胞，如脂肪细胞及平滑肌细胞分化。虽然SKP在真皮内的具体分布及根本作用尚未被彻底了解，但是它所具有的多胚层(神经外胚层及中胚层)分化及自我更新能力，均说明其为真皮来源的成体干细胞。Bartsch等人以胶原酶消化真皮组织，得到与SKP截然不同的贴壁生长细胞，在体外也能长期培养，并具有成骨、成脂肪及成肌肉的三向分化能力，表现出间充质干细胞的特征。最近的研究显示，来源于人真皮的中间丝蛋白阴性细胞，也能贴壁生长和长期传代培养。这种真皮层细胞
%的密度（24-72小时）。3、诱导间充质干细胞将其中一份培养的细胞用MSC成骨分化培养基诱导，另一份培养的细胞用 MSC生长培养基培养作为阴性对照。4、间充质干细胞的分化培养诱导培养14天，每3天更换一次培养基。操作时候小心不要破坏细胞的单层。 要点：在整个染色过程中不要让细胞在干的状态下放置超过30秒！三、向成软骨分化的操作流程 1、接种间充质干细胞 在96 U型底板中用MSC生长培养基接种间充质干细胞，每接种1x105个MSC。 2、MSC芽体形成 在24-48小时
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