- ￥3438
- 翌圣生物（Yeasen）
- 14524ES60
- 上海
- 2025年12月24日
企业认证
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- 详细信息
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- 文献和实验
- 技术资料
- 库存：
现货
- 英文名：
Tn5 Transposase (10 U/μL)
- 保质期：
一年
- 供应商：
翌圣生物科技（上海）股份有限公司
- 保存条件：
-85~-65℃保存
- 规格：
100U
Tn5 Transposase是野生型Tn5转座酶的突变形式。Tn5转座酶是Tn5转座子的核心酶，具有高效的切割和插入活性。Tn5转座酶识别其转座子序列的内端(inside end, IE)、外端(outside end, OE)和嵌合端(mosaic end, ME)序列。利用其转座原理，能携带核酸打断并连接入底物核酸序列中，形成打断和插入机制，广泛应用于体外转基因以及转座酶法建库中。
产品信息
| 货号 | 14524ES60/14524ES76 |
| 规格 | 100 U/500 U |
组分信息
| 组分名称 | 14524ES60 | 14524ES76 |
| Tn5 Transposase (10 U/μL) | 10 μL | 50 μL |
储存条件
-85~-65℃保存，有效期1年。
使用说明
以高通量测序建库为例，在使用前，请务必仔细阅读使用说明。
- 接头制备
Primer A：5'-phos-CTGTCTCTTATACACATCT-NH2-3'
Primer B：5′-TCGTCGGCAGCGTCAGATGTGTATAAGAGACAG-3′
Primer C：5′-GTCTCGTGGGCTCGGAGATGTGTATAAGAGACAG-3′
2）使用Annealing Buffer溶解Primer A、Primer B、Primer C至100 μM。
3）分别配制如下反应体系：
| 组分 | 反应1 |
| Primer A（100 μM） | 10 μL |
| Primer B（100 μM） | 10 μL |
| total | 20 μL |
| 组分 | 反应2 |
| Primer A（100 μM） | 10 μL |
| Primer C（100 μM） | 10 μL |
| total | 20 μL |
5）反应结束后，将反应1和反应2等体积混合，混匀。命名为Adapter Mix，-25~-15℃保存。
2．转座子生成
1） 配置以下反应体系：
| 组分 | 体积（μL） |
| Tn5 Transposase (10 U/μL) | 2 |
| Adapter mix (25 μM)* | 1.6 |
| Assemble Buffer | Up to 20 |
2）反应条件：使用移液器轻轻吹打充分混匀。置于25℃反应1 h（热盖关闭）。反应产物命名为Tn5 Mix，可直接应用于建库实验，或-25~-15℃保存。
3. DNA片段化测试
1）配置以下反应体系：
| 组分 | 体积（μL） |
| Input DNA (50 ng/μL) | X* |
| 5×Tagment buffer | 4 |
| Tn5 Mix | 1** |
| ddH2O | Up to 20 |
**如需提高打断程度，可提高Tn5 Mix使用量；反之，可减少酶使用量。
2）片段化反应程序
轻轻吹打或振荡混匀，短暂离心。按照下表所示反应程序，进行片段化反应。
| 温度 | 时间 |
| 热盖105℃ | On |
| 55°C | 10 min |
| 4°C | Hold |
配置以下反应体系，在上述片段化产物中添加下表中各反应组分，使用移液器轻轻吹打20次混匀。
| 组分 | 体积（μL） |
| 片段化产物 | 20 |
| 6×Terminate Solution | 4 |
| Total | 24 |
| 温度 | 时间 |
| 热盖105℃ | On |
| 55°C | 10 min |
| 4°C | Hold |
4）片段化产物质量控制
a. 使用 Qubit 进行浓度测定。
b. 使用 Agilent Technologies 2100 Bioanalyzer 进行长度分布检测。
5）片段化产物扩增
可根据具体的实验目的与测序平台选择合适的试剂进行扩增实验。
注意事项
1. 转座酶对温度敏感，建议尽快完成接头包埋，生成的转座子可于-25~-15℃保存，有效期1年。
2. 本产品仅作科研用途。
3. 为了您的安全和健康，请穿实验服并佩戴一次性手套操作。
4. 该产品不提供Buffer，如需转座酶加Buffer，可采购Cat#12900ES。
Ver.CN20230822
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文献和实验干货 | CUT and Tag 核心酶 Hyperactive PA/PG-Tn5 Transposase 大解密
比高、实验周期短（ 1 天实现从细胞到文库构建）、可重复性好等显著优势，尤其适用于早期胚胎发育、干细胞、肿瘤以及表观遗传学等研究领域。 图 1. CUT&Tag 原理图 由于 CUT&Tag 主要是针对极低细胞起始量进行实验，因此对核心酶原料有着极高的要求。CUT&Tag 技术的核心原料酶是 Hyperactive PA/PG-Tn5 Transposase ，它具有高活性，对微量 DNA 有高灵敏度和高亲和力，能有效抓取数十个细胞中的有限结合位点等特点
Mesoplasma florum: Tn5 Transposase
AGGTAGCTTGCAGTGGGCTTACATGGCGATAGCTAGACTGGGCGGTTTTATGGACAGCAAGCGAACCGGAATTGCCAGCTGGGGCGCCCTCTGGGAAGGT TGGGAAGCCCTGCAAAGTAAACTGGATGGCTTTCTTGCCGCCAAGGATCTGATGGCGCAGGGGATCAAGATCGGGTGCTTTGCCAAGGGTACCAATGTTT TAATGGCGGATGGGTCTATGA Testing the transposase Transform 50 μl of E. coli Top10 electrocompetent cells with: Tn5
Single Primer ("Semi-Random") P
Reamplification 40 µL H2O 10 µL 10x M-PCRB 10 µL 4 dNTPs @ 2 mM each 10 µL Pn primer @ 5 µM 10 µL Po primer @ 0.2 µM 10 µL DNA from part 1 10 µL "T/TS" @ 0.4 u Taq/µL --------- 100 µL Load glass capillaries and amplify: 30"x94°C 30
