立克次氏体通用PCR试剂盒

立克次氏体通用PCR试剂盒
英文名称：Rickettsia spp.
立克次氏体（Rickettsia）为革兰氏阴性菌，是一类专性寄生于真核细胞内 的 G-原核生物。是介于细菌与病毒之间，而接近于细菌的一类原核生物。一般 呈球状或杆状,是专性细胞内寄生物，主要寄生于节肢动物，有的会通过蚤、虱、 蜱、螨传入人体、如斑疹伤寒、战壕热。因此对立克次氏体进行快速灵敏的诊 断具有重要的意义。本产品就是为此目的根据 PCR 原理开发的产品。

产品特点：

1. 即开即用，用户只需要提供 DNA 模板。 
2. 引物经过精心优化，专一性强，只扩增立克次氏体通用。 
3. 提供阳性对照，便于区分假阴性样品。 
4. PCR mix 中含上样染料，PCR 后可以直接上样电泳。 
5. 本试剂盒足够做 40μL 体系的 PCR 50 次，但只能用于科研。

立克次氏体通用PCR试剂盒包装规格及成分：

编号	成分	规格
试剂一	PCR MagicMix 3.0	1 mL（红盖）
试剂二	超纯水	1 mL（亮黄色）
试剂三	立克次氏体通用 PCR 引物混合液	100 μL（白盖）
试剂四	立克次氏体通用PCR 阳性对照 （1×10E8 拷贝/μL）	50 μL（黄盖）
试剂五	使用手册	1 份

运输及保存：低温运输，-20℃保存，保存期限为一年。阳性对照需要单独放置，不要污染其 他试剂。

自备试剂：DNA 模板


 

使用方法：

一、样品 DNA 的制备
1. 用自选方法纯化 N+2 个样品的 DNA，本试剂盒跟市场上大多数核酸提取试剂盒兼容。
2. 如果有 N 个样品，则需要做 N+2 个提取，包括一个样品制备阳性对照和一 个样品制备阴性对照。样品制备阳性对照是在适量水（取决于试剂盒要求 的样品起始量）中加 10μL 立克次氏体通用 PCR 阳性对照的 1000 倍稀释液 而得，样品制备阴性对照是直接用水。提取结束后最后得到模板 DNA 放冰 上待用。
二、设置 PCR 反应（40μL 体系）
3. 对 N+2 个样品，在 PCR 时需要增加一个 PCR 阳性对照和一个 PCR 阴性 对照，故需要设置 N+4 个反应。在 N+4 个 PCR 管中分别加入下列成分：

成分	N+2 个 样品管	PCR 阴性 对照	PCR 阳性 对照
PCR Magic Mix 3.0	各 20 μL	20 μL	20 μL
立克次氏体通用 PCR 引物 混合液	各 2 μL	2 μL	2 μL
N+2 个样品 DNA 模板	各 18 μL
PCR 阴性对照（水）		18 μL
PCR 阳性对照（立克次氏体通用 PCR 阳性对照的 1000 倍稀释液）			18 μL

4. 按下表设置 PCR 反应：

过程	温度	时间
预变性	95℃	5 min
PCR 反应 （35 个循环）	95℃	30 sec
	55℃	30 sec
	72℃	30 sec
最后延伸	72℃	7 min

三、电泳检测 5. 取 10-20 μL PCR 产物。1%琼脂糖凝胶电泳检测 PCR 产物。本产品提供的 PCR Mix 在扩增结束后可以直接上样，不需要另外再加 loading buffer。阳性对照必须有预期条带出现，阴性对照必须无任何扩增，否则实 验无效。对没有扩增产物的样品，可以稀释 10 倍后重复 PCR 扩增以排 除 PCR 抑制剂的感染。


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