猪圆环病毒通用PCR试剂盒

猪圆环病毒通用PCR试剂盒
英文名称：Porcine Circovirus (PCV) PCR Kit
猪圆环病毒(Porcine Circovirus，PCV)有 PCV-1 和 PCV-2 两种型，其 基因组为单链 DNA，长度分别为 1759nt 和 1768nt，其同源性低于 80%，但 基因组结构相似。PCV-1 无致病性，广泛存在于猪体内。PCV-2 对猪具有较强 的易感性，感染猪可自鼻液、粪便等废物中排出病毒，经口腔、呼吸道途径感 染不同年龄的猪。感染病毒后的病猪最常见的症状是猪只渐进性消瘦或生长迟 缓，这也是诊断所必需的临床依据，其他症状有厌食、精神沉郁、行动迟缓、 皮肤苍白、被毛蓬乱、呼吸困难，咳嗽为特征的呼吸障碍，较少发现的症状为 腹泻和中枢神经系统紊乱，一旦感染该病毒，发病率一般很低而病死率都很高， 对养猪业带来较大的经济损失，因此快速检测猪圆环病毒具有重要意义。本产品是根据 PCR 原理开发检测猪圆环病毒通用的试剂盒。

产品特点：
1. 即开即用，用户只需要提供病毒样品。
2. 根据猪圆环病毒通用保守序列设计的专一性引物，与相关病毒无交叉反应。
3. 灵敏度可以达到几百拷贝/反应。
4. 一管式荧光定量 PCR 检测，避免后续污染。
5. 本试剂盒足够 50 次 20μL 反应体系的荧光定量 PCR。
6. 本产品只适用于科研，不能用于临床诊断。

猪圆环病毒通用PCR试剂盒包装规格及成分：

编号	成分	规格
试剂一	PCR MagicMix 3.0	1 mL（红盖）
试剂二	超纯水	1 mL（亮黄色）
试剂三	猪圆环病毒通用 PCR 引物混合液	100 μL（白盖）
试剂四	猪圆环病毒通用 PCR 阳性对照 （1×10E8 拷贝/μL）	50 μL（黄盖）
试剂五	使用手册	1 份

运输及保存：低温运输，-20℃保存，保存期限为一年。阳性对照需要单独放置，不要污染其 他试剂。

自备试剂：DNA 模板


 

使用方法：

一、样品 DNA 的制备
1. 用自选方法纯化 N+2 个样品的 DNA，本试剂盒跟市场上大多数核酸提取试剂盒兼容。
2. 如果有 N 个样品，则需要做 N+2 个提取，包括一个样品制备阳性对照和一 个样品制备阴性对照。样品制备阳性对照是在适量水（取决于试剂盒要求 的样品起始量）中加 10μL 猪圆环病毒通用 PCR 阳性对照的 1000 倍稀释液 而得，样品制备阴性对照是直接用水。提取结束后最后得到模板 DNA 放冰 上待用。
二、设置 PCR 反应（40μL 体系）
3. 对 N+2 个样品，在 PCR 时需要增加一个 PCR 阳性对照和一个 PCR 阴性 对照，故需要设置 N+4 个反应。在 N+4 个 PCR 管中分别加入下列成分：

成分	N+2 个 样品管	PCR 阴性 对照	PCR 阳性 对照
PCR Magic Mix 3.0	各 20 μL	20 μL	20 μL
猪圆环病毒通用 PCR 引物 混合液	各 2 μL	2 μL	2 μL
N+2 个样品 DNA 模板	各 18 μL
PCR 阴性对照（水）		18 μL
PCR 阳性对照（猪圆环病毒通用 PCR 阳性对照的 1000 倍稀释液）			18 μL

4. 按下表设置 PCR 反应：

过程	温度	时间
预变性	95℃	5 min
PCR 反应 （35 个循环）	95℃	30 sec
	55℃	30 sec
	72℃	30 sec
最后延伸	72℃	7 min

三、电泳检测 5. 取 10-20 μL PCR 产物。1%琼脂糖凝胶电泳检测 PCR 产物。本产品提供的 PCR Mix 在扩增结束后可以直接上样，不需要另外再加 loading buffer。阳性对照必须有预期条带出现，阴性对照必须无任何扩增，否则实 验无效。对没有扩增产物的样品，可以稀释 10 倍后重复 PCR 扩增以排 除 PCR 抑制剂的感染。


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