产品简介
本产品RNA提取液是一种用于细胞或组织总RNA提取的试剂,利用异流青酸胍等物质迅速裂解细胞,使RNA释放并萃取至苯酚中,同时内含RNase抑制剂,防止RNA降解,保持RNA的完整性。
使用说明
自备氯仿、异丙醇、DEPC水或无RNase水、75%乙醇(用DEPC水或无RNase水配制)。
1. 细胞或组织样本裂解
贴壁细胞:去除细胞培养液,用适量预冷PBS清洗细胞,尽量将PBS吸除干净。按照6孔板每孔加1 mL RNA提取液,12孔板每孔加0.5 mL RNA提取液的用量向孔板中加入RNA提取液,轻轻晃动使板底细胞充分接触RNA提取液,移液枪吹打细胞,使细胞裂解,然后转移至离心管中,室温静置5 min。
悬浮细胞:离心收集细胞,尽量将上清液吸除干净,每1-10×106个细胞加入1mLRNA提取液,移液枪吹打数次使细胞裂解,室温静置5min。
组织样本:组织剪切成小块(黄豆大小),放入预冷的匀浆器内,每100 mg组织加入1 mL RNA提取液,匀浆至无可见组织块。(可选步骤:4℃,12000g离心10 min使组织碎片分离,转移上清至新的离心管中。)
血液样本:新鲜血液样本每200μL加入800μL RNA提取液,移液枪反复吹打混匀,室温静置5-10min;如果是组织RNA稳定保存液保存的血液样本,先经4000-5000rpm离心5min,弃上层组织RNA稳定保存液,再加入800μL RNA提取液,移液枪反复吹打混匀,室温静置5-10min。
2. RNA抽提:每1mL RNA提取液加200μL氯仿,涡旋混匀(推荐涡旋混匀仪)或离心管上下颠倒剧烈晃动15s,室温静置3-5min。
3. 离心:4℃,12000g离心15min,小心转移上层无色水相至新的离心管中,每毫升提取液大约可吸取500-550 μL。
4. 沉淀RNA:向上述收集的水相提取物管中加入500μL异丙醇,轻轻颠倒混匀数次,室温或4℃沉淀10min(或-20℃沉淀15min)。
5. 离心:4℃,12000g离心10min,在管底可见白色沉淀即为总RNA,弃上清。
6. 洗涤:加入1mL 75%乙醇,颠倒混匀(至白色沉淀漂浮为佳)。4℃,12000g离心5min,弃上清,再高速短暂离心(5000g离心3-5s),用微量吸头小心吸尽液体。
7. RNA溶解:将有RNA沉淀的离心管开口静置3-5min,使RNA稍微晾干,然后加入20-50μL DEPC水或无RNase水(或者使用RNA溶解液)使RNA充分溶解,即可用于浓度检测及后续实验,不能及时进行后续实验时需将RNA置于-70℃保存。注意不可让RNA过分干燥,否则很难溶解,且会影响A260/280比值
储存与运输
冰袋运输;4℃避光保存,有效期12个月。
注意事项
1. 所有枪头和离心管均需无RNA酶污染,可购买本公司无菌无酶耗材。
2. 本试剂含异硫青酸胍和重蒸酚,避免接触皮肤或吸入。
3. 操作时请穿实验服,并佩戴一次性手套。