RNA提取液

产品简介

本产品RNA提取液是一种用于细胞或组织总RNA提取的试剂，利用异流青酸胍等物质迅速裂解细胞，使RNA释放并萃取至苯酚中，同时内含RNase抑制剂，防止RNA降解，保持RNA的完整性。

使用说明

自备氯仿、异丙醇、DEPC水或无RNase水、75%乙醇（用DEPC水或无RNase水配制）。

1. 细胞或组织样本裂解

贴壁细胞：去除细胞培养液，用适量预冷PBS清洗细胞，尽量将PBS吸除干净。按照6孔板每孔加1 mL RNA提取液，12孔板每孔加0.5 mL RNA提取液的用量向孔板中加入RNA提取液，轻轻晃动使板底细胞充分接触RNA提取液，移液枪吹打细胞，使细胞裂解，然后转移至离心管中，室温静置5 min。

悬浮细胞：离心收集细胞，尽量将上清液吸除干净，每1-10×10⁶个细胞加入1mLRNA提取液，移液枪吹打数次使细胞裂解，室温静置5min。

组织样本：组织剪切成小块（黄豆大小），放入预冷的匀浆器内，每100 mg组织加入1 mL RNA提取液，匀浆至无可见组织块。（可选步骤：4℃，12000g离心10 min使组织碎片分离，转移上清至新的离心管中。）

血液样本：新鲜血液样本每200μL加入800μL RNA提取液，移液枪反复吹打混匀，室温静置5-10min；如果是组织RNA稳定保存液保存的血液样本，先经4000-5000rpm离心5min，弃上层组织RNA稳定保存液，再加入800μL RNA提取液，移液枪反复吹打混匀，室温静置5-10min。

2. RNA抽提：每1mL RNA提取液加200μL氯仿，涡旋混匀（推荐涡旋混匀仪）或离心管上下颠倒剧烈晃动15s，室温静置3-5min。

3. 离心：4℃，12000g离心15min，小心转移上层无色水相至新的离心管中，每毫升提取液大约可吸取500-550 μL。

4. 沉淀RNA：向上述收集的水相提取物管中加入500μL异丙醇，轻轻颠倒混匀数次，室温或4℃沉淀10min（或-20℃沉淀15min）。

5. 离心：4℃，12000g离心10min，在管底可见白色沉淀即为总RNA，弃上清。

6. 洗涤：加入1mL 75%乙醇，颠倒混匀（至白色沉淀漂浮为佳）。4℃，12000g离心5min，弃上清，再高速短暂离心（5000g离心3-5s），用微量吸头小心吸尽液体。

7. RNA溶解：将有RNA沉淀的离心管开口静置3-5min，使RNA稍微晾干，然后加入20-50μL DEPC水或无RNase水（或者使用RNA溶解液）使RNA充分溶解，即可用于浓度检测及后续实验，不能及时进行后续实验时需将RNA置于-70℃保存。注意不可让RNA过分干燥，否则很难溶解，且会影响A260/280比值

储存与运输

冰袋运输；4℃避光保存，有效期12个月。

注意事项

1. 所有枪头和离心管均需无RNA酶污染，可购买本公司无菌无酶耗材。

2. 本试剂含异硫青酸胍和重蒸酚，避免接触皮肤或吸入。

3. 操作时请穿实验服，并佩戴一次性手套。