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1年
- 供应商:
上海经科化学科技有限公司
- 保存条件:
2-8℃
- 规格:
100T
本产品是一种高效、稳定、快速并可以去除基因组DNA污染的反转录系统,5×RTMasterMix为一管式反转录预混 Mix,含有反转录所需的多种试剂(HˉRTase、RNaseInhibitor、dNTP Mixture、Buffer),只需加入模板RNA引物和水即可进行反应。试剂盒采用的反转录酶去除了 RNase H活性,且热稳定性更强,可耐受55℃反应,提高复杂RNA模板的反转录。MasterMix中添加了热敏双链特异性核酸酶,可在反转录过程中直接降解去除RNA样品中残留的基因组DNA(gDNA)污染。Oligo dT & Random Primer单管提供,如需使用特异性引物,可直接将其替换使用。
产品组成:
| 组分 | 100T |
| 5×RT MasterMix | 400μl |
| 20×Oligo dT & Random Primer | 100μl |
| RNase free H2O | 2×1ml |
使用方法:
1、将模板RNA和试剂在冰上解冻,使用前将每种溶液轻弹或者轻微涡旋振荡混匀,简短离心以收集残留在管壁的液体到管底。
2、在RNase free管中冰上配制以下反应体系:
| 组分 | 体积 |
| Total RNA/mRNA | 0.1-2μg |
| 5×RT MasterMix | 4μl |
| 20×Oligo dT & Random Primer 或特异性引物 | 1μl |
| RNase free H2O | 补足20μl |
3、移液器轻轻吹打混匀,放入 PCR仪运行如下程序
| 快速程序 | 标准程序 |
| 37℃,15~30min | 25℃,10min |
| 85℃,5min | 55℃,30~60min |
通常可选择快速程序进行反转录反应;如果模板具有复杂二级结构或高GC区域,使用标准程序。
4、得到的cDNA产物可立即用于qPCR反应,或在-20℃保存,并在半年内使用;长期存放建议分装后在-80℃保存。cDNA应避免反复冻融。
保存方法:避免反复冻融,-20 ℃保存 1年。
注意事项:
1、避免RNase污染。
2、为保证反转录成功建议使用高质量的RNA样品。
3、5×RT MasterMix非常粘稠,易吸附在管壁和吸头外导致损失,用前请点甩离心,
并避免吸头外壁沾附损失。
4、为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。
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文献和实验棕色小玻璃瓶,标准包装10mg,20mg,50mg,100mg,或根据客户要求提供相应包装
含梗率是指烟梗在烟叶中所占的质量分数(%)。烟叶的含梗率受烟叶的类型。品种、烟叶所生长的部位、叶片形状和厚度、梗的粗细等影响。不同品种烟叶含梗率关系为烤烟>白肋烟>香料烟。烤烟含梗率在24-30%,平均为25%,左右。烟叶着生部位不同,含梗率也不同,,中下部叶高于上部叶。由于烟叶从叶基到叶尖,烟梗由粗逐渐变细,打叶复烤工艺利用这一特点,可在打叶前设置切尖工序,以降低打叶设备负荷和减少叶片造碎,提高大中片合格
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gDNA 的影响,但这种引物设计耗时耗力,并且对于没有内含子的基因,这种方法可能就行不通了。 这时,通过 DNase 对提取的 RNA 进行预处理成为简单并且唯一的方法。诺唯赞的三代逆转录酶系列产品(R312/R323)含有 gDNA 清除模块,2 min 就能有效的清除基因组 DNA 的污染。 3. 选取合适的 RT Primer 是关键 通常 RT primer 可分为三类:oligo dT,随机引物以及基因特异性引物。根据不同的实验需求需要选择适合的引物进行使用。oligo dT
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