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- 酶联免疫吸附测定，是指利用抗体分子能与抗原分子特异性结合的特点，将游离的杂蛋白和结合于固相载体的目的蛋白分 离，并利用特殊的标记物对其定性或定量分析的一种检测方法。
- 浙江省
- 2025年11月24日
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嘉兴硕玺生物有限公司
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酶联免疫吸附测定（ELISA）
酶联免疫吸附测定（ELISA）：
酶联免疫吸附测定，是指利用抗体分子能与抗原分子特异性结合的特点，将游离的杂蛋白和结合于固相载体的目的蛋白分 离，并利用特殊的标记物对其定性或定量分析的一种检测方法。
实验意义： ELISA是免疫学中的经典实验，是将可溶性的抗原或抗体结合到聚苯乙烯等固相载体上，利用抗原抗体结合专一性进行免疫 反应的定性和定量检测方法。包括直接ELISA、夹心ELISA、竞争ELISA，最常用的是夹心ELISA。
实验步骤 ： 
结果展示： 
实验完成周期及交付标准 ：
- 实验周期：1-3天
- 交付标准：ELISA检测原始OD值、ELISA检测标准曲线、ELISA检测目的蛋白浓度值、柱状图、实验报告（实验步骤、试 剂、仪器等）
需确认的信息：
- 样本的种属及类型，是血清还是血浆？
- 样本数为多少？是否需要做重复？
- 是否提供试剂盒？需要进口试剂盒还是国产试剂盒？
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文献和实验在目前的以HRP作为标记酶的商品ELISA试剂盒中，如以TMB为底物，则提供的底物为A和B两瓶应用液；如以OPD为底物，则试剂盒提供OPD片剂或粉剂，临用前配制。一般商品试剂盒显色反应条件为37℃或室温反应15~30min。从理论上说，37℃30min才可以使HRP的底物催化反应完全，尽管在最初的10min内，绝大部分催化反应即可完成。因此，为使弱阳性样本孔能有充分的显色，建议在37℃下反应25~30min后，终止反应比色测定。此外，在加入底物开始显色反应前，最好是先检查一下底物溶液的有效
。室温温育的反应，操作时的室温应严格限制在规定的范围内，标准室温温度是指20-25℃，但具体操作时可根据说明书的要求控制温育。室温温育时，ELISA板只要平置于操作台上即可。应注意温育的温度和时间应按规定力求准确。为保证这一点，一个人操作时，一次不宜多于两块板同时测定。 5 洗涤 洗涤在ELISA过程中虽不是一个反应步骤，但却也决定着实验的成败。ELSIA就是靠洗涤来达到分离游离的和结合的酶标记物的目的。通过洗涤以清除残留在板孔中没能与固相抗原或抗体结合的物质，以及在反应过程中非特异性地吸附
酶联免疫吸附（ELISA）可以：免疫酶染色各种细胞内成份的定位研究抗酶抗体的合成显现微量的免疫沉淀反应定量检测体液中抗原或抗体成份01 实验方法原理双抗体夹心法（常用于测定抗原）双抗体夹心法测抗原示意图用特异性抗体包被于固相载体，经洗涤后加入含有抗原之待测样品，如待检样品中有相应抗原存在，即可与包被于固相载体上的特异性抗体结合，经保温孵育洗涤后，即可加入酶标记特异性抗体，再经孵育洗涤后，加底物显色进行测定，底物降解的量即为欲测抗原的量。02 实验步骤材料准备实验材料：血清、血浆、体液实验
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