等孢球虫通用PCR试剂盒

等孢球虫通用PCR试剂盒
英文名称：Isospora spp.
等孢球虫（Isospora）是广泛存在于哺乳类、鸟类和爬行类动物的肠内寄生 性原虫。一般认为感染人体的等孢球虫为贝氏等孢球虫（I．belii Wenyon，1923） 和纳塔尔等孢球虫（I．natalensis Elson－Dew，1953）。等孢球虫病是由等 孢子球虫寄生在人肠黏膜上皮，造成肠道黏膜损伤的一种寄生性原虫病。临床表 现为腹泻、恶心、呕吐和腹部压痛等症状。寄生于人类的等孢球虫有两种：贝氏 等孢球虫（lsospora belli）和纳氏等孢球虫（I.natalensis）。人体感染的等孢 球虫以贝氏等孢球虫为主，纳氏等孢球虫非常罕见。等孢子球虫病是一种自限性 疾病，多数患者虫体可自行被清除。本产品就是以荧光定量 PCR 技术为 基础开发的专门检测等孢球虫的试剂盒。

产品特点：
1. 即开即用，用户只需要提供病毒样品。
2. 根据等孢球虫通用保守序列设计的专一性引物，与相关病毒无交叉反应。
3. 灵敏度可以达到几百拷贝/反应。
4. 一管式荧光定量 PCR 检测，避免后续污染。
5. 本试剂盒足够 50 次 20μL 反应体系的荧光定量 PCR。
6. 本产品只适用于科研，不能用于临床诊断。

等孢球虫通用PCR试剂盒包装规格及成分：

编号	成分	规格
试剂一	PCR MagicMix 3.0	1 mL（红盖）
试剂二	超纯水	1 mL（亮黄色）
试剂三	等孢球虫通用 PCR 引物混合液	100 μL（白盖）
试剂四	等孢球虫通用 PCR 阳性对照 （1×10E8 拷贝/μL）	50 μL（黄盖）
试剂五	使用手册	1 份

运输及保存：低温运输，-20℃保存，保存期限为一年。阳性对照需要单独放置，不要污染其 他试剂。

自备试剂：DNA 模板


 

使用方法：

一、样品 DNA 的制备
1. 用自选方法纯化 N+2 个样品的 DNA，本试剂盒跟市场上大多数核酸提取试剂盒兼容。
2. 如果有 N 个样品，则需要做 N+2 个提取，包括一个样品制备阳性对照和一 个样品制备阴性对照。样品制备阳性对照是在适量水（取决于试剂盒要求 的样品起始量）中加 10μL 等孢球虫通用 PCR 阳性对照的 1000 倍稀释液 而得，样品制备阴性对照是直接用水。提取结束后最后得到模板 DNA 放冰 上待用。
二、设置 PCR 反应（40μL 体系）
3. 对 N+2 个样品，在 PCR 时需要增加一个 PCR 阳性对照和一个 PCR 阴性 对照，故需要设置 N+4 个反应。在 N+4 个 PCR 管中分别加入下列成分：

成分	N+2 个 样品管	PCR 阴性 对照	PCR 阳性 对照
PCR Magic Mix 3.0	各 20 μL	20 μL	20 μL
等孢球虫通用 PCR 引物 混合液	各 2 μL	2 μL	2 μL
N+2 个样品 DNA 模板	各 18 μL
PCR 阴性对照（水）		18 μL
PCR 阳性对照（等孢球虫通用 PCR 阳性对照的 1000 倍稀释液）			18 μL

4. 按下表设置 PCR 反应：

过程	温度	时间
预变性	95℃	5 min
PCR 反应 （35 个循环）	95℃	30 sec
	55℃	30 sec
	72℃	30 sec
最后延伸	72℃	7 min

三、电泳检测 5. 取 10-20 μL PCR 产物。1%琼脂糖凝胶电泳检测 PCR 产物。本产品提供的 PCR Mix 在扩增结束后可以直接上样，不需要另外再加 loading buffer。阳性对照必须有预期条带出现，阴性对照必须无任何扩增，否则实 验无效。对没有扩增产物的样品，可以稀释 10 倍后重复 PCR 扩增以排 除 PCR 抑制剂的感染。


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