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多酚氧化酶(polypheno
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Polyphenol Oxidase(PPO) Assay Kit
3个月
瓦兰生物
4℃
96T
多酚氧化酶(polyphenol oxidase,PPO)试剂盒( 货号:WS3110W 微板法 96 样)一、产品简介:多酚氧化酶(polyphenol oxidase,EC 1.10.3.1,PPO)又称酪氨酸酶、儿茶酚酶、酚酶等,是自然界中分布极广的一种含铜氧化酶,普遍存在于植物、真菌、昆虫的质体中。植物受到机械损伤和病菌侵染后,PPO 催化酚与 O2 氧化形成醌,使组织形成褐变.以便损伤恢复,防止或减少感染,提高抗病能力,与果蔬食品加工、储藏;茶叶品质和组培等密切相关。多酚氧化酶 PPO 是一种含铜的氧化酶,能够催化邻苯二酚产生醌,后者在 420nm 有特征光吸收。二、试剂盒组分与配制:试剂名称规格保存要求提取液液体 110mL×1 瓶4℃保存试剂一液体 20mL×1 瓶4℃保存试剂二液体 5mL×1 瓶4℃避光保存三、需自备的仪器和用品:酶标仪、96 孔板、台式离心机、水浴锅、可调式移液器、研钵、冰和蒸馏水。四、多酚氧化酶(PPO)的测定:建议正式实验前选取 2 个样本做预测定,了解本批样品情况,熟悉实验流程,避免实验样本和试剂浪费!1、样本制备① 组织样本:称取约 0.1g 组织(水分充足的样本可取 0.5g),加入 1mL 提取液,进行冰浴匀浆,4℃×12000rpm,离心 15min,取上清,置冰上待测。【注】:若增加样本量,可按照组织质量(g):提取液体积(mL)为 1:5~10 的比例进行提取② 液体样本:直接检测。若浑浊,离心后取上清检测。2、上机检测① 酶标仪预热 30min 以上,调节波长至 420nm。② 在 96 孔板中依次加入:试剂名称(μL)测定管试剂一170试剂二50样本50混匀,立即在 420nm 处读取 A1 值,5min 后再读取 A2 值,ΔA= A2- A1。【注】:1. 试剂一和试剂二可以用排枪加。2. 若 A2 值大于 1.5,可减少反应时间 T(如 5min 可减至 2min 后读取 A2)或减少样本加样量 V1(如减少至 20μL,则试剂一相应增加),改变后的反应时间 T 和加样量 V1 需代入公式重新计算。五、结果计算:1、按样本鲜重计算:本试剂盒仅供科研使用2单位定义:每分钟每克组织在反应体系中使 420nm 处吸光值变化 0.01 为一个酶活单位(U)。PPO(ΔOD420/min/g 鲜重)=ΔA÷(W× V1÷V)÷0.01÷T =400×ΔA÷W2、按样本蛋白浓度计算:单位定义:每分钟每毫克组织蛋白在反应体系中使 420nm 处吸光值变化 0.01 为一个酶活单位(U)。PPO(ΔOD420/min/mg prot)=ΔA÷(V1×Cpr)÷0.01÷T =400×ΔA÷Cpr3、按照液体体积计算:单位定义:每分钟每毫升液体在反应体系中使 420nm 处吸光值变化 0.01 为一个酶活单位(U)。PPO(ΔOD420/min /mL)=ΔA÷V1÷0.01÷T =400×ΔAV----加入提取液体积,1 mL;V1----加入样本体积,0.05mL;T----反应时间,5min;W----样本质量,g;Cpr----样本蛋白质浓度,mg/mL;建议使用本公司的 BCA 蛋白含量检测试剂盒。
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