- ￥408
- umibio
- UR32081
- 2026年04月02日
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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 库存：
999
- 英文名：
2×SYBR Green qPCR Master Mix (ROX2)
- 保质期：
12月
- 供应商：
上海宇玫博生物科技有限公司
- 保存条件：
冰袋运输，-20℃避光存储。
- 规格：
500 Rxns×20μL
★产品名称：2×SYBR Green qPCR 试剂（预混 ROX2型）
★产品用途：适用于实时荧光定量 PCR（qPCR）的反应试剂， 适用需要 low ROX 校准的仪器，如 ABI 7500，Bio-Rad iQ5 等。
★目录价格：408；产品货期：现货；
★产品货号：UR32081；产品规格：500 Rxns×20μL；
★保存方式：-20℃；运输条件：低温；
产品描述：
本试剂盒采用具有超强扩增能力和抗干扰能力的热启动DNA聚合酶，结合其高度优化的缓冲液体系和染料系统，使之具备了更强的扩增效率、抗干扰能力及更高的灵敏度和特异性。在相同的情况下具有起峰更早、得到的荧光信号更强、Ct值更小及熔解曲线特异性更高等特点。此外，为了进一步简化操作，本试剂盒的2×SYBR Green qPCR Master Mix预混了ROX2染料（low ROX），从而只需要将模板cDNA、引物以及ddH2O添加进去，即可进行qPCR反应。
产品组成：
|
组分名称 |
UR32080 |
UR32081 |
|
2×SYBR Green qPCR Master Mix(ROX2)* |
1 mL |
5 mL |
*包含热启动DNA聚合酶, dNTPs, Mg2+, buffer, 和 SYBR Green I染料，预混了低浓度ROX(ROX2)用于校正不同孔之间的荧光信号误差。
产品优势：
专注于外泌体提取和配套试剂盒研发；
性价比高，为您的研究开展节省成本；
数百篇参考文献让您放心使用无忧购；
适用的仪器型号：
ABI 7500, 7500 Fast, Quant-Studio 3, 5, 6, 7, 12K Flex, Dx, ViiA™7; Stratagene MX4000™, MX3000P™, MX3005P™等
无需ROX校正的仪器型号：
Bio-Rad CFX96™, CFX384™, iCycler iQ™, iQ™5, MyiQ™, MiniOpticon™,Opticon®, Opticon 2, Chromo4™; Roche LightCyclerTM 96, Roche LightCyclerTM 480; Eppendorf Mastercycler® ep realplex, realplex 2s; Illumina Eco qPCR; Qiagen/Corbett Rotor-Gene® Q, Rotor-Gene® 3000, Rotor-Gene® 6000; Thermo Scientific PikoReal Cycler; Analytikjena qTOWER 3G; Cepheid SmartCycler®等
（如果仪器不在下表中，请选用UR32071：2×SYBR Green qPCR试剂（预混ROX1型））
质控数据：
产品使用：
1、 使用前，将2×SYBR Green qPCR Master Mix (ROX2)试剂从-20℃冰箱中取出，室温放置5~10 min或用手紧握试剂管使之充分融化，上下颠倒5~10次充分混匀（非常重要），然后使用离心机短暂离心至管底，放在冰上备用。
2、 逆转录反应得到的cDNA建议稀释并充分混匀后再作为模板使用，这样可以提高实验的重复性。通常建议稀释5~10倍后再使用（具体的稀释倍数根据基因表达丰度来确定）。在20 μL的qPCR反应体系中如果模板cDNA稀释10倍，建议使用4 μL的cDNA（2~8 μL），按照如下表格进行qPCR反应体系的配制：
3、 qPCR加样体系的配制：为了使加样误差降低到最低，一般建议将cDNA和ddH2O配制成预混液，2×SYBR Green qPCR Master Mix和引物对配制成预混液，分别混匀后再依次加入到每个反应孔中（例如，对于20 μL的qPCR反应体系：每个反应孔中，cDNA和ddH2O的预混液加4 μL，2×SYBR Green qPCR Master Mix和引物对的预混液加16 μL）；或者根据个人熟练掌握的加样方式进行加样。
4、 加样完成后，盖上封板膜封紧，然后用离心机1000 rpm离心1 min，将液体离心至qPCR孔板底部。
5、 qPCR反应程序如下：
|
Step |
1 |
2 |
|
|
热启动酶活化*1 |
PCR反应(循环数40 cycles) |
||
|
解链 |
退火&延伸 （采集荧光信号）*2 |
||
|
温度 |
95℃ |
95℃ |
60℃ |
|
时间 |
5 min |
10 sec |
30 sec |
*1：95℃反应5 min的目的是活化热启动酶，该步骤为必须步骤，因此不能省略；
*2：在退火&延伸这一步骤需要进行荧光信号的采集。
上述反应程序设置好后，按照仪器默认的程序添加熔解曲线。
下方表格提供了一种代表性的熔解曲线程序供参考：
|
Step |
1 |
2 |
3 |
|
升降温速度 |
100% |
100% |
1% |
|
温度 |
95℃ |
60℃ |
95℃ |
|
时间 |
15 sec |
1 min |
30 sec |
|
采集数据 |
- |
- |
采集荧光信号 |
关于qPCR反应是否良好的判断：
1、 如果扩增曲线呈典型的S型曲线，荧光背景信号阶段、荧光信号指数扩增阶段及平台期均完整可见，熔解曲线单峰，内参Ct值在合理范围内（通常可在13~22之间，典型的内参Ct值在15~20之间），则可认为该反应正常；
2、 同一个模板和引物的重复孔数据Ct值相差0.5以内；
3、 同时满足以上两个条件的可以认为数据可用。
常见的注意事项、操作要点及优化方法：
1、 实验开始前首先验证引物是否适用，标准与上述标准类似，主要观察扩增曲线与熔解曲线；
2、 引物验证好用后应分装几份并放在-20℃保存，以防止污染或降解；
3、 RNA及cDNA的质量均对qPCR的结果具有很大的影响，因此应尽量保证RNA不降解。 RNA提取后应尽快进行逆转录，且避免反复冻融。如果预计使用量较大，则可以一次多逆转录几管cDNA。如果不立即使用cDNA，则建议保存在-80℃冰箱。
经典案例：
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文献和实验SYBR Green Quantitative PCR Protocol
the relative values for your gene of interest’s change in expression. SYBR qPCR Quick Protocol StandardsØ Dilute the cDNA ~4-fold (e.g. 21μl sample + 59μl H2 O = 80μl)Ø Pool an appropriate amount from each sample to create standard 1 (i.e. 30μl x
真香！用 qPCR 做外泌体研究，南京医科大学拿下 41 分 SCI
等）、miRNA 加尾法逆转录试剂盒做反转录：适用于短片段 RNA（主要为 miRNA）的加尾法。 4）qPCR 检测 采用 Umibio 2×SYBR Green qPCR 试剂：预混 ROX1 型适用于 ABI 5700 等设备、预混 ROX2 型适用于 ABI 7500 等设备。 5）数据分析：采用仪器自带的 QPCR 分析软件进行数据分析 可以看到 qPCR 检测外泌体可行且可靠，但实验过程并不简单，因此我们对经常会遇到的问题及解答也进行了整理，帮助大家更好的完成实验。 qPCR检测外泌常见问题及解决
REAL TIME PCR WITH SYBR GREEN I 建议PROTOCOL
1、反应体系 25ulCocktail 20 ul: Primer FP 1 ul + Primer RP 1u + 2 * SYBR GREEN I MIX 12.5 + H2O 5.5 ul cDNA 5 ul2、Primer 浓度，需要摸索，从200nM到700nm等，设置不同浓度。3、每个引物浓度，从well 1到12设置4个样本，阳性cDNA 1和2，NTC以及H2O，做triplicate。4、若用ABI7000或7700，所有的PCR条件可设置成一致的，减少麻烦，当然，引物
